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zsm0507

金虫 (小有名气)

[交流] 诡异PCR扩增,扩出来一次,就再也扩不出来了

诡异PCR扩增,就第一次扩出来了,以后再也扩不出来了,或者条件和扩出来那次没有任何改变,真的快郁闷死了。希望PCR高手指点下,万分感谢!

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-6 at 08:34 ]
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taork

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
PCR就几个因素,第一模板:可能你的基因组在反复冻融中断裂,建议重新抽提基因组或更换模板
第二:引物,一般引物会有二聚体(设计好了可除去),你可以观察50bp左右有没有浅带即可,不行就换引物
第三:其他试剂,一般不会出现问题,最好就是所有试剂均换一套,可借同学的使用
另外非特异性扩增也必须注意,留样也是其一。
17楼2009-09-19 07:48:53
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paulajjh

木虫 (著名写手)

你用的什么模板啊?
2楼2009-09-05 10:57:15
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paulajjh

木虫 (著名写手)

我之前做过细菌基因的PCR,如果用菌液,很不稳定,经常重复性很差.但后来提取基因组,再P就很稳定了
3楼2009-09-05 10:58:16
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112976553

金虫 (小有名气)

多P几次,总会成功~

我许下第一千零一个愿望
4楼2009-09-05 11:02:41
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