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zsm0507

金虫 (小有名气)

[交流] 诡异PCR扩增,扩出来一次,就再也扩不出来了

诡异PCR扩增,就第一次扩出来了,以后再也扩不出来了,或者条件和扩出来那次没有任何改变,真的快郁闷死了。希望PCR高手指点下,万分感谢!

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-6 at 08:34 ]
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huanginae5500

新虫 (初入文坛)


zsm0507(金币+1,VIP+0): 9-13 08:30
引用回帖:
Originally posted by huanginae5500 at 2009-9-5 11:15:
看看是不是引物的效力不高。引物效力不高的话(简并碱基较多),有时候可以扩增出来,但是大多时候可能扩不出来。并且有的基因在不同支系中的进化规律有所不同,因此不同的支系可能需要设计不同的引物。如果简并碱 ...

如果你第一次p出来的是目的片段,并且后面的实验条件都没变的话,我还是觉得可能是引物的问题。我们最近在做的一组实验也是一开始用的引物不好,后来适当改进引物,减少了简并碱基;并针对不同的类群设计了几组引物。
10楼2009-09-06 00:20:15
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paulajjh

木虫 (著名写手)

你用的什么模板啊?
2楼2009-09-05 10:57:15
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paulajjh

木虫 (著名写手)

我之前做过细菌基因的PCR,如果用菌液,很不稳定,经常重复性很差.但后来提取基因组,再P就很稳定了
3楼2009-09-05 10:58:16
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112976553

金虫 (小有名气)

多P几次,总会成功~

我许下第一千零一个愿望
4楼2009-09-05 11:02:41
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