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flyingwings

[交流] 【求助】等度不能将目标物洗脱,不是死时间出峰,就是不出峰,什么原因?

实验中发现等度不能将目标物洗脱,不是死时间出峰,就是不出峰,而梯度洗脱却可以调整保留时间,这样是不是不合理呢?梯度:0-10min,20%乙腈+80%水(含0.05%TFA)------45%乙腈+55%水(含0.05%TFA),出峰时间在六分钟左右,减去空白,标准品有两个峰,且峰高相当(标准品是新买的,进口的),难道标准品污染了?等度的条件试了很多,不是不出峰,就是死时间出峰,为什么呢?请教各位了!谢谢!
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happy169

木虫 (著名写手)

冰王子蜜


flyingwings(金币+1):谢谢参与
这个帖子不应该求助,感觉经验贴比较合适!梯度是逐步改变洗脱条件的一种洗脱方式,楼主显然找到了适合的分析方法,另外觉得应该相信自己,怎么会色谱条件好了又考虑标准品纯度了呢?除非有文献说此类标准品不可能那样出峰!!
我为新生
2楼2009-09-04 09:55:16
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yxy90

木虫 (正式写手)


flyingwings(金币+1):谢谢参与
有没有可能是进样量(浓度等)比较大,进样阀处有残留,相当于二次进样,所以出两个峰呀。色谱条件用梯度主要是平衡柱子很麻烦,其他没什么,用梯度挺好的。

[ Last edited by yxy90 on 2009-9-4 at 10:02 ]
3楼2009-09-04 10:00:57
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天蝎玫瑰

铜虫 (初入文坛)


flyingwings(金币+1):谢谢参与
梯度洗脱出峰,说明在梯度过程里有最适合出峰的流动相比例。等度条件可能没有设对比例。可以通过计算梯度出峰的时候估计出峰时流动相的比例,然后配制等度条件,但是应该没有梯度情况下柱效高。
楼主的意思是不是等度不出峰,梯度标准品出两个峰啊?如果样品只有一个峰,说明标准品分解或者污染了,如果样品也两个峰,可能流动相不合适,试试调节PH。
花开无声,雪落有痕。
4楼2009-09-04 10:09:22
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zhangsibao

木虫 (正式写手)

回复楼主


flyingwings(金币+1):谢谢参与
建议楼主看看有关色谱分析方面的书籍。搞明白梯度洗脱的含义再说。你的实验过程就是证明了梯度的含义就是增强样品组分的洗脱能力。有些样品只能采用梯度洗脱的方式来增加分离度,以期得到较好的峰形,从而有较好的定量分析结果。
5楼2009-09-04 12:26:38
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静jing

flyingwings(金币+1):谢谢参与
opq691(金币-1,VIP+0):如此回复不给金币 扣除 9-4 14:06
同意楼上说的
6楼2009-09-04 12:45:40
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youarebeloved

金虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
opq691(金币+1,VIP+0):谢谢回帖交流 9-4 14:06
在做等度洗脱的时候,平衡时间是否充分。如果标准品出两个峰,是否有一个是前一样品带入。你的进样器是手动还是自动的。
从梯度来看,其中肯定有一种比例是适合的,只是在等度的时候流动相对柱的平衡时间不够。
7楼2009-09-04 13:11:25
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