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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » DNA提取空板问题
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cuican371

新虫 (初入文坛)

[交流] DNA提取空板问题

我用ctab法提取植物叶片DNA，每次常规除杂后异丙醇沉淀，得到白色絮状沉淀，离心后产物大概能盖着1.5ml离心管的底吧，50ul dd水溶解，溶解性非常好。但是0.8%琼脂糖电泳后总是空板，甚至连一点杂质都见不到，（电压120v）请问怎么回事啊？紫外测了一次，但是由于当时稀释的太稀了，吸光度低于仪器误差下限，大概260/280=0.021/0.024……好像没什么意义哈
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1楼 2009-09-03 22:23:51
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xhlxhl

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
没遇见过，你点MARKER了么，是不是没加EB啊，还有电极没放反吧
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2楼2009-09-04 00:40:02
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genetics183

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
和我遇到的问题一样，我也发给帖子，见：
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=1511162
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士虽有学，而行为本焉。
3楼2009-09-04 09:14:14
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plxjby

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
在eb里染色了，电极当然也没有反，不过没有放mark，同一个板上还有我同学的样，他的能跑出来
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4楼2009-09-04 13:38:12
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changes

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by cuican371 at 2009-9-3 22:23:
我用ctab法提取植物叶片DNA，每次常规除杂后异丙醇沉淀，得到白色絮状沉淀，离心后产物大概能盖着1.5ml离心管的底吧，50ul dd水溶解，溶解性非常好。但是0.8%琼脂糖电泳后总是空板，甚至连一点杂质都见不到，（电 ...

DNA应该是透明的，你的是白色絮状沉淀，可能是杂质居多，DNA较少。建议你加大下上样量，10μl吧，再试一下。
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5楼2009-09-04 21:43:40
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cuican371

新虫 (初入文坛)
我用的就是10ul，没有任何条带。我现在怀疑是提取的时候DNA没能有效的沉淀下来，反而把抽提液中的nacl和一些小分子沉淀下来了。因为这些沉淀起初很明显，放置时间一长，或是加75%乙醇洗涤的时候会再次溶解。为了验证，我在异丙醇里滴了一滴5mol/L的nacl，结果出现沉淀的情况和抽提时几乎一致……
现在的问题是，为什么我的DNA没有被沉淀下来呢？而那些小分子杂质怎么除去呢？
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6楼2009-09-05 00:37:15
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