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cuican371

新虫 (初入文坛)

[交流] DNA提取空板问题

我用ctab法提取植物叶片DNA,每次常规除杂后异丙醇沉淀,得到白色絮状沉淀,离心后产物大概能盖着1.5ml离心管的底吧,50ul dd水溶解,溶解性非常好。但是0.8%琼脂糖电泳后总是空板,甚至连一点杂质都见不到,(电压120v)请问怎么回事啊?紫外测了一次,但是由于当时稀释的太稀了,吸光度低于仪器误差下限,大概260/280=0.021/0.024……好像没什么意义哈
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xhlxhl

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
没遇见过,你点MARKER了么,是不是没加EB啊,还有电极没放反吧
2楼2009-09-04 00:40:02
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genetics183

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
和我遇到的问题一样,我也发给帖子,见:
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=1511162
士虽有学,而行为本焉。
3楼2009-09-04 09:14:14
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plxjby


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
在eb里染色了,电极当然也没有反,不过没有放mark,同一个板上还有我同学的样,他的能跑出来
4楼2009-09-04 13:38:12
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changes

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by cuican371 at 2009-9-3 22:23:
我用ctab法提取植物叶片DNA,每次常规除杂后异丙醇沉淀,得到白色絮状沉淀,离心后产物大概能盖着1.5ml离心管的底吧,50ul dd水溶解,溶解性非常好。但是0.8%琼脂糖电泳后总是空板,甚至连一点杂质都见不到,(电 ...

DNA应该是透明的,你的是白色絮状沉淀,可能是杂质居多,DNA较少。建议你加大下上样量,10μl吧,再试一下。
5楼2009-09-04 21:43:40
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cuican371

新虫 (初入文坛)

我用的就是10ul,没有任何条带。我现在怀疑是提取的时候DNA没能有效的沉淀下来,反而把抽提液中的nacl和一些小分子沉淀下来了。因为这些沉淀起初很明显,放置时间一长,或是加75%乙醇洗涤的时候会再次溶解。为了验证,我在异丙醇里滴了一滴5mol/L的nacl,结果出现沉淀的情况和抽提时几乎一致……
现在的问题是,为什么我的DNA没有被沉淀下来呢?而那些小分子杂质怎么除去呢?
6楼2009-09-05 00:37:15
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