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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助有关黑曲霉原生质体的转化
汕头大学海洋科学接受调剂
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beibei3372

金虫 (初入文坛)

[交流] 求助有关黑曲霉原生质体的转化

最近一直在做黑曲霉的原生质体，用于重组质粒的转化，只是一直没有转化子的长出……
试过不少条件的优化却仍然没有起色，分析后还是觉得是原生质体的质量问题。
期待各位高手给予指点，非常感谢！！！
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1楼 2009-09-03 15:43:34
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chenyyy

无虫 (正式写手)
★
beibei3372(金币+1,VIP+0):谢谢你 9-8 09:18
用察氏培养基养菌丝,比较嫩的,然后用蜗牛酶破壁....梯度离心后收集原生质体
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2楼2009-09-08 08:51:18
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beisimai895

木虫 (小有名气)
用什么做筛选标记的？
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3楼2009-09-08 09:10:00
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beibei3372

金虫 (初入文坛)

可以详细一点吗

引用回帖:
Originally posted by chenyyy at 2009-9-8 08:51:
用察氏培养基养菌丝,比较嫩的,然后用蜗牛酶破壁....梯度离心后收集原生质体

我养菌丝用的不是察氏培养基，就是普通的YG培养基，长得也不错。比较嫩的菌丝是通过什么来判断的呢？梯度离心可以具体一些吗？我老早试过，效果不行……
谢了哈！
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4楼2009-09-08 09:18:32
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人
原生质体再生率测了吗？电击可以试试！！
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细推物理须行乐。
5楼2009-09-08 09:22:36
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beibei3372

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by beisimai895 at 2009-9-8 09:10:
用什么做筛选标记的？

是以乳清酸核苷-5′-磷酸脱羧酶(pyrG)基因作为标志基因，乳清酸核苷-5′-磷酸脱羧酶是尿嘧啶核苷酸合成中一种关键性酶，缺乏该酶的pyrG缺陷株不能在不含尿嘧啶核苷的培养基上生长。通过基因转化，向其导入含pyrG基因的质粒，可使其获得在不含尿嘧啶核苷培养基上生长的能力。
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6楼2009-09-08 09:22:58
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beibei3372

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by lauren180 at 2009-9-8 09:22:
原生质体再生率测了吗？电击可以试试！！

再生率没测具体的，只是平行对照时完全培养基里的长了，缺陷型培养基里的没有长……
谢了哈！
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7楼2009-09-08 09:26:35
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chenyyy

无虫 (正式写手)
★
beibei3372(金币+1,VIP+0):谢谢你 9-8 15:42
引用回帖:
Originally posted by beibei3372 at 2009-9-8 09:18:

我养菌丝用的不是察氏培养基，就是普通的YG培养基，长得也不错。比较嫩的菌丝是通过什么来判断的呢？梯度离心可以具体一些吗？我老早试过，效果不行……
谢了哈！

我在察示培养基上放了一层称量纸(更有利于收集菌丝体),然后涂布甘油,甘油可以让菌体长得更慢些

划线接种...这样长出来的菌丝体很白..较嫩..时间不到一天吧(具体时间忘了)

[ Last edited by chenyyy on 2009-9-8 at 14:47 ]
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8楼2009-09-08 14:46:27
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