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liguanjun

银虫 (小有名气)

[交流] 求个SDS-PAGE的 问题

最近在在跑SDS-PAGE,过程中出现了点问题,请教一下。
  问题:总跑不出来条带,(我用了两个MARK,其中一个是预染过的,跑出来了,但这个是一个公司的新产品效果不好,另外一个是未预染的一点也没跑出来,我的样品也是一点也没有)
   备注;样品处理 (我的是细菌)1.收集菌体裂解破碎,离心取上清
                                                   2. 发酵液直接煮沸十分钟
这两种方法都没有跑出条带,问问是什么原因?
是样品处理的原因还是什么? 该怎么处理?
  急!
谢谢!
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
有一个marker都没跑出来,是不是染色的问题?重新配一下固定液和染色液咯?
2楼2009-09-03 12:06:22
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tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我觉得有几个地方可以检查。你看看,第一,是不是你配loading buffer的时候出了问题?(溴酚蓝)。第二,1.收集菌体裂解破碎,离心取上清,也需要煮,加了溴酚蓝煮。maker也煮。第三,是考染吧?你弄新染液试一下?
3楼2009-09-03 13:14:22
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bioxixi

木虫 (著名写手)

首先怀疑染色问题,
其次我想即使是新产品也不该效果不好啊,所以建议制胶过程找找原因,或是那些缓冲液需要重新配置了,
最后就是样品的量或者浓度稍加大一些
试试看吧
4楼2009-09-03 15:47:26
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jessica533

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
未预染的marker不见条带,那么90%的问题是出在染色液上
把忧愁微掉,将快乐积起。
5楼2009-09-03 18:22:40
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hu6704526

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这个我觉得需要注意的问题有点多
不过这么成熟的技术,只要样品没问题应该是没问题的,建议制样上再摸索一下
6楼2009-09-03 20:51:00
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zsl2000001

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我估计是染色的问题,你再试试看 ?
7楼2009-09-04 20:35:24
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lqyjj

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我感觉很可能是染色液有问题,处理样品,也就是先加入适量loadingbuffer,然后煮样
8楼2009-09-05 13:49:34
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