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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求个SDS-PAGE的 问题
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liguanjun

银虫 (小有名气)

[交流] 求个SDS-PAGE的 问题

最近在在跑SDS-PAGE，过程中出现了点问题，请教一下。
  问题：总跑不出来条带，（我用了两个MARK,其中一个是预染过的，跑出来了，但这个是一个公司的新产品效果不好，另外一个是未预染的一点也没跑出来，我的样品也是一点也没有）
   备注;样品处理 （我的是细菌）1.收集菌体裂解破碎，离心取上清
                                                   2. 发酵液直接煮沸十分钟
这两种方法都没有跑出条带，问问是什么原因？
是样品处理的原因还是什么？ 该怎么处理？
  急！
谢谢！
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1楼 2009-09-03 10:05:33
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有一个marker都没跑出来，是不是染色的问题？重新配一下固定液和染色液咯？
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2楼2009-09-03 12:06:22
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tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者
★
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我觉得有几个地方可以检查。你看看，第一，是不是你配loading buffer的时候出了问题？（溴酚蓝）。第二，1.收集菌体裂解破碎，离心取上清，也需要煮，加了溴酚蓝煮。maker也煮。第三，是考染吧？你弄新染液试一下？
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3楼2009-09-03 13:14:22
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bioxixi

木虫 (著名写手)
首先怀疑染色问题，
其次我想即使是新产品也不该效果不好啊，所以建议制胶过程找找原因，或是那些缓冲液需要重新配置了，
最后就是样品的量或者浓度稍加大一些
试试看吧
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4楼2009-09-03 15:47:26
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jessica533

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
未预染的marker不见条带，那么90%的问题是出在染色液上
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把忧愁微掉，将快乐积起。
5楼2009-09-03 18:22:40
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hu6704526

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这个我觉得需要注意的问题有点多
不过这么成熟的技术，只要样品没问题应该是没问题的，建议制样上再摸索一下
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6楼2009-09-03 20:51:00
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zsl2000001

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我估计是染色的问题，你再试试看 ？
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7楼2009-09-04 20:35:24
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lqyjj

新虫 (初入文坛)
★
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我感觉很可能是染色液有问题，处理样品，也就是先加入适量loadingbuffer，然后煮样
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8楼2009-09-05 13:49:34
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