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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助 WESTERN
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caoyunhai

木虫 (初入文坛)

[交流] 求助 WESTERN

用WESTERN测大约160KDa 分子量蛋白 用多少浓度的 分离胶和浓缩胶为宜？
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1楼 2009-09-03 10:03:29
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bioxixi

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
caoyunhai(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 9-3 17:31
caoyunhai(金币+1): 2010-03-09 12:27
吼吼 分子量好大
可以用大marker跑跑摸摸条件
建议分别跑5%，10%；3-4%，7-8%试一下，延长胶凝固时间、电泳时间和转膜时间，电泳和转膜的电流不要太大
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2楼2009-09-03 15:57:02
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)
★
caoyunhai(金币+1):谢谢参与
可以用5%的胶试试，就不分浓缩和分离了。
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3楼2009-09-03 16:44:00
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yifanyifan

木虫 (正式写手)
★
caoyunhai(金币+1):谢谢参与
建议分离胶8——10%，不用太低了，呵呵分离胶浓度小了不是操作！
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good good study
4楼2009-09-03 17:17:41
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amisking
★
caoyunhai(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by bioxixi at 2009-9-3 15:57:
吼吼 分子量好大
可以用大marker跑跑摸摸条件
建议分别跑5%，10%；3-4%，7-8%试一下，延长胶凝固时间、电泳时间和转膜时间，电泳和转膜的电流不要太大

支持！
5楼2009-09-03 17:31:25
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肖特

新虫 (初入文坛)
★
caoyunhai(金币+1):谢谢参与
我做了个200KD的，参考实验室其他人的条件

5%浓缩胶，8%分离胶


当时偷懒没摸索条件，楼主时间充足的话，建议用二楼的方法摸索一下
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6楼2009-09-03 17:35:57
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
caoyunhai(金币+1):谢谢参与
直接使用5%与8%即可。完全没问题。10%也是可以的，只要跑进胶就可以了，不是么~~
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7楼2009-09-03 18:01:47
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)
★
amisking(金币+1,VIP+0): 9-3 18:53
目的蛋白至少要跑胶的三分之一，不然和其他蛋白可能分不开，出现非特异信号。如果跑进胶就行，那还制那么长的胶干什么。蛋白电泳不就是想把目的蛋白和其他蛋白分开来么。
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8楼2009-09-03 18:11:13
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dj04164

木虫 (正式写手)
★
caoyunhai(金币+1):谢谢参与
８％的胶应该可以吧，多跑一会儿吧。
ｐｓ：二楼提到转膜电流不可以太大，如果大了会怎样？我用潜水槽，电流开到３５０，会对蛋白有什么影响么？
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9楼2009-09-03 18:36:59
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yifanyifan

木虫 (正式写手)
看来有些兄弟只执着于书本呀，呵呵！
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good good study
10楼2009-09-03 19:38:51
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