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caoyunhai

木虫 (初入文坛)

[交流] 求助 WESTERN

用WESTERN测大约160KDa 分子量蛋白 用多少浓度的 分离胶和浓缩胶为宜?
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bioxixi

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
caoyunhai(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 9-3 17:31
caoyunhai(金币+1): 2010-03-09 12:27
吼吼 分子量好大
可以用大marker跑跑摸摸条件
建议分别跑5%,10%;3-4%,7-8%试一下,延长胶凝固时间、电泳时间和转膜时间,电泳和转膜的电流不要太大
2楼2009-09-03 15:57:02
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)


caoyunhai(金币+1):谢谢参与
可以用5%的胶试试,就不分浓缩和分离了。
3楼2009-09-03 16:44:00
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yifanyifan

木虫 (正式写手)


caoyunhai(金币+1):谢谢参与
建议分离胶8——10%,不用太低了,呵呵分离胶浓度小了不是操作!
good good study
4楼2009-09-03 17:17:41
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caoyunhai(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by bioxixi at 2009-9-3 15:57:
吼吼 分子量好大
可以用大marker跑跑摸摸条件
建议分别跑5%,10%;3-4%,7-8%试一下,延长胶凝固时间、电泳时间和转膜时间,电泳和转膜的电流不要太大

支持!
5楼2009-09-03 17:31:25
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肖特

新虫 (初入文坛)


caoyunhai(金币+1):谢谢参与
我做了个200KD的,参考实验室其他人的条件

5%浓缩胶,8%分离胶


当时偷懒没摸索条件,楼主时间充足的话,建议用二楼的方法摸索一下
6楼2009-09-03 17:35:57
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


caoyunhai(金币+1):谢谢参与
直接使用5%与8%即可。完全没问题。10%也是可以的,只要跑进胶就可以了,不是么~~
7楼2009-09-03 18:01:47
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)


amisking(金币+1,VIP+0): 9-3 18:53
目的蛋白至少要跑胶的三分之一,不然和其他蛋白可能分不开,出现非特异信号。如果跑进胶就行,那还制那么长的胶干什么。蛋白电泳不就是想把目的蛋白和其他蛋白分开来么。
8楼2009-09-03 18:11:13
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dj04164

木虫 (正式写手)


caoyunhai(金币+1):谢谢参与
8%的胶应该可以吧,多跑一会儿吧。
ps:二楼提到转膜电流不可以太大,如果大了会怎样?我用潜水槽,电流开到350,会对蛋白有什么影响么?
9楼2009-09-03 18:36:59
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yifanyifan

木虫 (正式写手)

看来有些兄弟只执着于书本呀,呵呵!
good good study
10楼2009-09-03 19:38:51
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