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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 有关ELISA的问题
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zuiainaruto

新虫 (初入文坛)

[交流] 有关ELISA的问题

最近在做ELISA，蛋白为重组蛋白，17KD左右，其阳性结果很低，与阴性结果差不多，但是另外做免疫印迹却做的出来。所以想请教一下有经验的高手，问题大概出在哪？会不会是蛋白活性的问题？该注意哪些地方？谢谢！
还有，如果先使蛋白变性，在做ELISA，这样可以吗？
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1楼 2009-09-02 11:05:33
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汪洋孤舟

★
zuiainaruto(金币+1,VIP+0): 10-14 23:31
1、包被抗体和酶标抗体是多抗的话，蛋白变不变性，对ELISA结果没有影响
2、如果用的是单抗，可能捉不住抗原，对结果有影响
3、采用棋盘滴定确定检测条件，然后检测
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7楼2009-09-15 21:45:26
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zuiainaruto

新虫 (初入文坛)
请大虾们指点迷津~~

[ Last edited by zuiainaruto on 2009-9-7 at 09:49 ]
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3楼2009-09-03 18:18:25
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ellar

铜虫 (小有名气)
这个跟变性没有关系,你想检测你的蛋白,包板肯定用的是抗这个蛋白的抗体,蛋白与抗体结合后再与标记抗体结合,最后显色,即是双抗体夹心法,抗体可以与变性和非变性的蛋白结合,只要其抗原表位在,就会结合,跟变性没有关系.
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4楼2009-09-15 08:52:11
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
ELISA的功能在于测定空间表位，蛋白质没有变性。免疫印迹即WESTEN-blotting在于测定线性表位，蛋白质被变性。我想应该和变性有点关系吧。
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5楼2009-09-15 09:35:02
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