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zuiainaruto

新虫 (初入文坛)

[交流] 有关ELISA的问题

最近在做ELISA,蛋白为重组蛋白,17KD左右,其阳性结果很低,与阴性结果差不多,但是另外做免疫印迹却做的出来。所以想请教一下有经验的高手,问题大概出在哪?会不会是蛋白活性的问题?该注意哪些地方?谢谢!
还有,如果先使蛋白变性,在做ELISA,这样可以吗?
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350784478

木虫 (正式写手)

友情顶贴
朝为田舍郎,暮登天子堂。将相本无种,男儿当自强。
2楼2009-09-02 15:21:44
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zuiainaruto

新虫 (初入文坛)

请大虾们指点迷津~~

[ Last edited by zuiainaruto on 2009-9-7 at 09:49 ]
3楼2009-09-03 18:18:25
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ellar

铜虫 (小有名气)

这个跟变性没有关系,你想检测你的蛋白,包板肯定用的是抗这个蛋白的抗体,蛋白与抗体结合后再与标记抗体结合,最后显色,即是双抗体夹心法,抗体可以与变性和非变性的蛋白结合,只要其抗原表位在,就会结合,跟变性没有关系.
4楼2009-09-15 08:52:11
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linxi8579

铜虫 (正式写手)

ELISA的功能在于测定空间表位,蛋白质没有变性。免疫印迹即WESTEN-blotting在于测定线性表位,蛋白质被变性。我想应该和变性有点关系吧。
5楼2009-09-15 09:35:02
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HDLWH

木虫 (正式写手)

先使蛋白变性,在做ELISA,是不可以的
6楼2009-09-15 09:55:42
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汪洋孤舟


zuiainaruto(金币+1,VIP+0): 10-14 23:31
1、包被抗体和酶标抗体是多抗的话,蛋白变不变性,对ELISA结果没有影响
2、如果用的是单抗,可能捉不住抗原,对结果有影响
3、采用棋盘滴定确定检测条件,然后检测
7楼2009-09-15 21:45:26
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