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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细菌同源重组进行基因敲除的同源臂最小需要多少
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haylig

铜虫 (小有名气)

[交流] 细菌同源重组进行基因敲除的同源臂最小需要多少 已有8人参与

革兰氏阴性 细菌在利用同源重组技术进行基因敲除时，构建的敲除载体上需要敲除的基因两端同源臂最少需要多少才能和目的菌进行同源重组，请有经验的介绍一下，谢谢。

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-1 at 20:36 ]
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1楼 2009-09-01 19:29:52
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Long777768

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 30937747 at 2012-08-03 20:33:48
难道大家用的都是Red/ET同源重组？两端各带50bp就可以啦，设计在引物里，我一直都是这样做的。
或者采用常规的，一般是两端各1000bp

您好！我最近在做red的同源重组，两步法插入我的目的片段，第二步老是不成功，步骤如下：1：PCR的方法将同源臂扩增到galk基因序列上，将带有同源臂galk基因插入到IE2基因  2：将第一步的同源臂PCR扩增到我的目的片段上，将带有同源臂的目的片段替换掉带有同源臂galk基因，这样就将带有同源臂的目的片段插入到IE2基因 ，同源臂大小50BP,是IE2基因上的50bpde 序列，第二步总是失败，麻烦您提提建议，非常
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11楼2018-04-23 21:05:06
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snow889

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
800-1000bp的效率比较高
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2楼2009-09-02 02:15:15
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haylig

铜虫 (小有名气)
啊，这么多，我的目的基因才1100bp，就是从正中间切开连接也才500多，这样的有什么办法吗？
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3楼2009-09-08 15:33:30
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xmuwangym

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by haylig at 2009-09-01 19:29:52:
革兰氏阴性 细菌在利用同源重组技术进行基因敲除时，构建的敲除载体上需要敲除的基因两端同源臂最少需要多少才能和目的菌进行同源重组，请有经验的介绍一下，谢谢。

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-1  ...

革阴的同源臂要求不需要那么长，这取决于你构建线性DNA的方式了。文献说35-50bp就够了。这种方法是直接把你的同源区段加到引物的5端，然后采用长引物PCR得到的。当然向上面的帖子中说的同源臂适当加长，是能够提高重组的效率的。
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厚德载物
4楼2010-04-26 19:04:28
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