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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 做过克隆的XDJM进来看看，如何减少涂布棒的烧烫次数？
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主

[交流] 做过克隆的XDJM进来看看，如何减少涂布棒的烧烫次数？

刚刚涂布了8个平板，
发现等待烧烫的涂布棒冷却下来确实是件很烦躁的事  
大家做克隆，是不是都是烧一次只涂布一个平板，能不能连续涂两个或多个？
做简单的克隆（质粒双酶切+PCR产物），一般我都做5个平板：
1.阳性对照（未酶切的质粒）；
2.酶连产物（酶切质粒：PCR产物=1：1）；
3.酶连产物（酶切质粒：PCR产物=3：1）；
4.酶连产物（酶切质粒，自连对照）；
5.阴性对照（什么也不转）。

请问：这样的情况最少要烧几次涂布棒？顺序是怎样（序号表示）？理由？
其实，我已经有想法了 看看和大家想的一样不？
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1楼 2009-08-28 20:17:30
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+3,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-29 08:11
houjinglhy(金币+2,VIP+0):现在感受态都做不好了 郁闷啊 只做一个却是是高手 呵呵 8-29 20:33
1.阳性对照（未酶切的质粒）；  一般不用做，除非对感受态没信心
2.酶连产物（酶切质粒：PCR产物=1：1）；   不用这种比例
3.酶连产物（酶切质粒：PCR产物=3：1）；   一般用这种比例，做一组即可
4.酶连产物（酶切质粒，自连对照）；    除非平端，否则不用做自连，就算自连做了，又能给你多少有用的，真正的还是得去鉴定组3的结果，就算自连或者酶切没切干净也是一样，一开始做一次看看就好，没必要次次做
5.阴性对照（什么也不转）。   除非对自己的操作没信心，否则一般不会轻易污染
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6楼2009-08-29 08:00:50
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695

木虫 (职业作家)
★
houjinglhy(金币+1,VIP+0):谢谢 8-29 20:35
烧一次涂一次啊，放在边上让它慢慢凉就是了啊，我平时只做3；1的、
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2楼2009-08-28 21:56:51
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michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
amisking(金币+3,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-29 08:11
houjinglhy(金币+1,VIP+0):这个是好方法 呵呵 谢了 8-29 20:34
当然每次都烧了 而且不少于2分钟，经常有一起涂很多板的时候，多准备几个就好了，准备4，5 个，涂完 烧完 放着，用下一个，再涂，再烧，再放，再用下一个，等5个都用完了，第一个也凉了。
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3楼2009-08-29 00:30:10
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+3,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-29 08:11
houjinglhy(金币+2,VIP+0):这个跟我想法最相近，我的做法是5，4，2，3，1 只烧一次 哈 你再仔细想想这样可以不 哈 8-29 20:32
是我的话烧两次玻璃棒：烧一次，5，4；然后烧一次，2，3，1

当然，涂布完后再烧一次。

楼主聪明人，理由我想楼主应该可以想到吧。

[ Last edited by brightfuture01 on 2009-8-29 at 01:47 ]
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
4楼2009-08-29 00:33:35
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