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houjinglhy荣誉版主 (文坛精英)
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做过克隆的XDJM进来看看，如何减少涂布棒的烧烫次数？
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刚刚涂布了8个平板， 发现等待烧烫的涂布棒冷却下来确实是件很烦躁的事  大家做克隆，是不是都是烧一次只涂布一个平板，能不能连续涂两个或多个？ 做简单的克隆（质粒双酶切+PCR产物），一般我都做5个平板： 1.阳性对照（未酶切的质粒）； 2.酶连产物（酶切质粒：PCR产物=1：1）； 3.酶连产物（酶切质粒：PCR产物=3：1）； 4.酶连产物（酶切质粒，自连对照）； 5.阴性对照（什么也不转）。 请问：这样的情况最少要烧几次涂布棒？顺序是怎样（序号表示）？理由？ 其实，我已经有想法了 看看和大家想的一样不？ |
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2楼2009-08-28 21:56:51
michaelwuqingyu
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amisking(金币+3,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-29 08:11
houjinglhy(金币+2,VIP+0):现在感受态都做不好了 郁闷啊 只做一个却是是高手 呵呵 8-29 20:33
amisking(金币+3,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-29 08:11
houjinglhy(金币+2,VIP+0):现在感受态都做不好了 郁闷啊 只做一个却是是高手 呵呵 8-29 20:33
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1.阳性对照（未酶切的质粒）； 一般不用做，除非对感受态没信心 2.酶连产物（酶切质粒：PCR产物=1：1）； 不用这种比例 3.酶连产物（酶切质粒：PCR产物=3：1）； 一般用这种比例，做一组即可 4.酶连产物（酶切质粒，自连对照）； 除非平端，否则不用做自连，就算自连做了，又能给你多少有用的，真正的还是得去鉴定组3的结果，就算自连或者酶切没切干净也是一样，一开始做一次看看就好，没必要次次做 5.阴性对照（什么也不转）。 除非对自己的操作没信心，否则一般不会轻易污染 |
6楼2009-08-29 08:00:50
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