| 查看: 1955 | 回复: 4 | |||
| 【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 Abby7171 的 1 个金币 ，回帖就立即获得 1 个金币，每人有 1 次机会 | |||
[交流]
常用蛋白表达系统
|
|||
|
引言 通常，难以从天然来源直接获得高质量的特定蛋白，尤其是人体蛋白。很多研究者通过将基因克隆至可在易培养细胞中操作的人工载体上，通过异源表达来克服这个问题，这些细胞包括大肠杆菌、毕赤（酵母）及一系列的昆虫细胞和哺乳动物细胞。 大肠杆菌表达系统 是应用最广泛的蛋白表达系统之一，市面上的重组蛋白有30%是由大肠杆菌表达系统生产而来，是小分子细胞质蛋白或结构域表达的首选宿主。在大肠杆菌表达系统中表达的外源基因包括原核基因和真核基因；原核基因可以直接在大肠杆菌中表达出来，真核基因含有内含子，大肠杆菌不能对mRNA进行剪切形成成熟的mRNA，因此，真核基因一般以cDNA构建表达载体在大肠杆菌系统中表达。 优势： 表达背景清楚、表达水平高、宿主菌繁殖快、培养简单、价格便宜、标签多 样、蛋白表达量大。 劣势： 没有真核生物的翻译后修饰、大蛋白可能不能正常折叠、一些蛋白可能对宿主有毒性、包涵体复性难。 质粒：Pet系列、pGEx系列、MBP（麦芽糖系统） 菌株：BL21、Rosetta等 标签：His、GST、MBP、SUMO、FLAG、GFP、HA等 主要应用：制备抗原、蛋白酶活性检测、蛋白互作（Co-IP、Pull-down等）、蛋白晶体研究、生化实验等。 酵母系统 自1979年，为了克服大肠杆菌表达系统的缺点，延伸了酵母表达系统。酵母表达系统兼有原核和高等真核系统的优点。与其他表达系统的基因存在于游离质粒上不同，它的表达质粒是通过同源重组整合在基因组上的，转化简单（不需要病毒原液），表达菌株可以长时间保持（大于10年）而不失活。 优势： 使用简单、表达量高、可大规模生产、相对低廉的价格、有很多真核的翻译后修饰和加工、大蛋白能较好地折叠。 劣势： 培养时间相较于细菌较长、标签较少、不能进行复杂的翻译后修饰。 质粒：pPIC3K、pPICZA、pPIC3.5K 菌株：X33、GS115 主要应用：适合于稳定表达有功能的外源蛋白质，而且可大规模发酵，是理想的重组真核蛋白生产制备工具。 昆虫系统 属于真核细胞表达系统，但不同于酵母和哺乳动物细胞表达系统。通过转座作用将转移载体中的表达组件定点转座到能在大肠杆菌中繁殖的杆状病毒穿梭载体上，通过抗性和蓝白斑筛选到重组穿梭质粒，提取穿梭质粒DNA转染昆虫细胞后，得到的子代病毒即为重组病毒。将病毒上清浸染昆虫细胞，获得表达的重组蛋白。 优势： 大蛋白正确折叠、具有真核翻译后修饰、毒性蛋白可被表达。 劣势： 费用较高、重组杆状病毒费时较长、需组织培养条件。 载体：pFastBAC 菌株：sf9、sf21、High-5等 主要应用：用于生产具有哺乳动物细胞末端唾液酸化修饰的N糖蛋白。 表达系统的选择 选择表达系统主要考虑蛋白质的大小、需要蛋白质的量、蛋白质来源的物种，以及蛋白质是否有二硫键和翻译后修饰。如果只需要少量目标蛋白——如当筛选一系列点突变用于酶活性研究时，不需要优化生产条件。但是，如果必须纯化一个活性蛋白和/或需要大量蛋白质时，在发现一个大规模可用方法前就需要尝试不同的宿主-载体系统、表达条件和/或纯化方案。 展望 随着药物审批上市相关激励政策不断完善和落实，加上数字化技术在中国的迅速发展，中国生物医药领域技术逐渐与世界接轨，国内外医药企业一致看好中国生物医药市场，纷纷开始扩大生物医药市场的部署与投资。重组蛋白表达系统将会随着生物技术的发展越来越成熟和多元化。 |
回复此楼» 猜你喜欢
085701环境工程专业，初试305，均过国家A区线
已经有5人回复
-
招调剂
已经有16人回复
-
286求调剂
已经有11人回复
-
诚求调剂，323分 有专利/科研/实习经历
已经有7人回复
-
材料325求调剂
已经有11人回复
-
中科大材料299求调剂
已经有13人回复
-
0817化学工程与技术312分求调剂
已经有6人回复
-
081700学硕一志愿北京化工大学数二英一过六级有竞赛求调剂
已经有5人回复
-
289求调剂
已经有12人回复
-
267化工调剂求助
已经有7人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
Ph.D. Opportunity in Mechanical Engineering – Fall 2026
+2/144
-
有机化- 陆红健课题组诚招2026级、2027级博士研究生及博士后
+1/96
-
面对核三废，威格屏蔽手套箱如何筑牢第一道安全防线？
+1/91
-
Journal of Environmental Management投稿
+1/90
-
北京信息科技大学智能机器人技术方向，联合清华培养硕生、博生，并长期招博士后
+1/80
-
澳大利亚皇家墨尔本理工大学（RMIT）理学院 院士团队2026招收CSC博士生
+1/40
-
现在科研环境这么差，我想这样试试
+1/19
-
武汉理工大学汽车工程学院低碳能源与光电传感实验室2026博士招生
+1/19
-
【实战型】【生物医药】2026青岛大学招博士生 含少数民族骨干计划2名！！！
+1/15
-
瑞典林雪平大学（linköping university）诚聘 氮化物基无机材料方向 博士后1名
+1/15
-
上海中医药大学 谢老师课题组招收2026年申请考核博士生1名
+1/13
-
绿色催化氧化团队接收调剂研究生
+1/11
-
求调剂 初试338 0824船舶 求控制、机械、船舶调剂
+1/10
-
温州大学李新华教授课题组2026年招收硕士研究生信息
+1/7
-
26 fall & 27 spring考博求助，控制/机器人/人工智能方向
+1/6
-
大湾区大学姚瑶课题组2026届博士生招生
+1/3
-
澳洲皇家墨尔本理工RMIT招收【AI隐私安全， 隐私计算方向】 CSC访问学者 联合培养
+1/2
-
青岛大学-马丽春教授-材料学院2026年招收博士研究生
+1/2
-
青岛科技大学高分子学院老师招收硕士生2名
+1/1
-
2026年浙江清华长三角研究院智慧能源中心招聘博士后-电气方向
+1/1
5楼2022-03-02 08:27:18
简单回复
tzynew2楼
2022-02-09 11:27
回复
Abby7171(金币+1): 谢谢参与
nono20093楼
2022-02-09 12:34
回复
Abby7171(金币+1): 谢谢参与
。 发自小木虫Android客户端
2022-02-16 08:12
回复
Abby7171(金币+1): 谢谢参与
