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若凤翥人腾

新虫 (初入文坛)

[求助] 高保真酶扩增不出短片段问题请教 已有1人参与

各位虫友,请教一个PCR问题。
我用高保真酶5s/kb扩增出了8kb的片段,但是5s/kb却扩增不出4kb的片段,排除引物和模板的问题,用taq酶扩增4kb片段是没有问题的,请假各位这是什么原因?@biostar2009
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shuaibia6

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我看了下,市面上确实有一些商家的快速扩增高保真酶扩增效率很夸张。你可以和你的材料供应商那边确认一下扩增效率和反应条件,相信他们会很愿意为你作答
4楼2022-01-28 08:47:10
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fengxueren

新虫 (正式写手)

2楼2022-01-28 02:18:58
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shuaibia6

金虫 (小有名气)

你确定不是在开玩笑吗,5秒/kb。8000bp你延伸40秒?还扩出来了
3楼2022-01-28 08:31:38
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爆炒小木虫

新虫 (小有名气)

我用过好几种所谓的高保真酶,两种解决办法,第一是提高延伸时间,第二是换引物

发自小木虫Android客户端
5楼2022-02-01 10:09:46
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