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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 高保真酶扩增不出短片段问题请教
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若凤翥人腾

新虫 (初入文坛)

[求助] 高保真酶扩增不出短片段问题请教 已有1人参与

各位虫友，请教一个PCR问题。
我用高保真酶5s/kb扩增出了8kb的片段，但是5s/kb却扩增不出4kb的片段，排除引物和模板的问题，用taq酶扩增4kb片段是没有问题的，请假各位这是什么原因？@biostar2009
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1楼 2022-01-27 18:22:23
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fengxueren

新虫 (正式写手)
没问题

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2楼2022-01-28 02:18:58
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shuaibia6

金虫 (小有名气)
你确定不是在开玩笑吗，5秒/kb。8000bp你延伸40秒？还扩出来了
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3楼2022-01-28 08:31:38
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shuaibia6

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我看了下，市面上确实有一些商家的快速扩增高保真酶扩增效率很夸张。你可以和你的材料供应商那边确认一下扩增效率和反应条件，相信他们会很愿意为你作答
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4楼2022-01-28 08:47:10
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爆炒小木虫

新虫 (小有名气)
我用过好几种所谓的高保真酶，两种解决办法，第一是提高延伸时间，第二是换引物

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5楼2022-02-01 10:09:46
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yuanbingzhan


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6楼2022-02-03 23:29:59
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