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Dylan苏木樨

新虫 (小有名气)

[求助] 请教2-oxoglutarate-dependent dioxygenases体外酶活检测注意事项 已有2人参与

最近在做一个2-oxoglutarate-dependent dioxygenases的体外酶活活性一直做不出来,于是找了一个文章报道的已知功能的酶去做体外酶活,蛋白纯化没问题,体外酶活条件也是按照文献报道做的,可是也做不出来,求助大神这个反应有没有什么需要注意的细节没。
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凯凯冲冲冲

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by Dylan苏木樨 at 2022-02-22 13:54:59
自己顶一下

体外酶活需要注意 温度 想请教 酶活计算的公式 怎么得来的呢 我看了好多参考文献 只是给出一个公式 想知道怎么从酶活的通用公式一步步换算 不知道有没有知道的呢
5楼2022-03-15 20:57:10
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
酶是怎么纯化出来的? 大肠杆菌重组表达?该酶是否含有Fe(2+), 底物是什么,活性检测是检测底物减少,还是产物增加?
行至水穷处,坐看云起时
2楼2022-01-16 12:16:27
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Dylan苏木樨

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2022-01-16 12:16:27
酶是怎么纯化出来的? 大肠杆菌重组表达?该酶是否含有Fe(2+), 底物是什么,活性检测是检测底物减少,还是产物增加?

酶是大肠杆菌诱导纯化出来的。这个酶反应需要Fe(2+),也已经在酶活体系中添加,底物是水杨酸。使用液相同时检测底物减少和产物生成都没有什么变化
3楼2022-01-18 12:32:00
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凯凯冲冲冲

新虫 (初入文坛)

想请教 酶活计算的公式 怎么得来的呢 我看了好多参考文献 只是给出一个公式 想知道怎么从酶活的通用公式一步步换算 不知道有没有知道的呢
6楼2022-03-15 20:58:29
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