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[求助]
使用EGFP r引物加自身上游引物P不出来，35S加自身上下游引物能P出来是怎么回事呢
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虫友们，有问题求助， 是这样的，我构建载体，连终载体验证的时候用的35S和自身下游进行PCR验证，都有条带我就继续做了（其实这里送去测序就发现35S方向的测序都有结果，egfp测序的结果都出不来，所以我中间设计引物加测，得出结果是序列正确也有EGFP部分），然后终载体转农杆菌验证的时候用egfp和35S进行菌P，P不出来，然后我做了35s加自身下游以及自身上游加egfpR的菌P，前者都有条带且正确，后者都无条带，连质粒也无结果。想求问这是什么情况呢？ egfp引物应该是没问题的，因为我把别人的质粒做模板P了一下能出条带，终载体质粒应该也没问题，和我用同一管终载体质粒的同学已经完成了构建，现在这个问题不是我特有，另外一个师姐有这个问题，egfp加自身上游引物P不出来。 |
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