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基于ERA核酸快检扩增 Cas12a 突变体，用于检测结核分枝杆菌中的链霉素耐药基因突变
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耐药结核病（TB）是一个严重的公共卫生问题，威胁着全球结核病的预防和控制。 我国是耐药结核高负担国家之一，据世界卫生组织估计，约有1/4－1/5耐多药结核病人发生在中国，耐药结核病的流行情况较为严重，2007～2008年开展的全国结核病耐药性基线调查结果显示，我国肺结核患者中耐多药率为8.3%，据此估算，我国每年新发耐多药患者12万例，占全球每年新发总数的24.0%，位列全球第二位。 而在近日，国家传染病临床研究中心研究者扩增偶联 Cas12a 突变体的模块，通过由先达基因研发的酶促恒温扩增技术（ERA技术），开发出Cas12 检测系统，可以识别更多非传统的原始间隔区相邻基序靶向序列，可以快速治疗和预防STR耐药结核病的疾病传播，有助于减少疾病传播和死亡率。 结核分枝杆菌的药敏试验是许多国家诊断耐药肺结核的金标准。但由于设备昂贵、污染率高、方法学耗时长，不利于疾病的早期诊断。耐药结核病阳性检出率低，缺乏快速、灵敏的检测方法，使大多数耐药结核病患者无法得到及时治疗。这导致疾病传播增加导致死亡人数增加，给结核病的防控带来诸多困难。 因此，迫切需要一种简单、快速、高灵敏度的耐药结核病检测方法。 而Sherlock的最吸引人的特点是实验的快速性。与传统PCR相比，酶促恒温扩增技术（ERA技术）可以将核酸扩增时间控制在30 min以内，简化了核酸扩增过程，缩短了扩增时间，且操作简单，灵敏度也可与PCR相媲美。 在此次研究中，目标基因通过ERA在基因组中扩增，并被 Cas12a RR 识别。同时，Sherlock 的单核苷酸特异性也被应用于与M.tb相关的突变。STR抗性具有高灵敏度和特异性，即使目标基因含量为总样本量的0.1%，Cas12a RR也能识别该基因。 与药敏实验和基因组测序相比，Cas12a检测系统具有更高的灵敏度和特异性，整个检测过程可在60 min内完成，在样本处理上也更有优势。这为耐药结核病患者的及时诊断和治疗带来了希望。 原文链接：https://doi.org/10.3389/fmicb.2021.796916 |
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