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liuxiaofei

铁虫 (小有名气)

[求助] 毕氏酵母表达问题 已有1人参与

各位好,我用毕氏酵母表达的蛋白,载体是pIC9K,我咋目的基因的5端融合了HIS标签,培养基里面有目的蛋白,但是挂柱子就是挂不出来蛋白,这是什么原因呢?求指教,谢谢
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

酵母上清比较复杂,过镍柱要进行透析或者超滤。或者用Ni Excel填料。普通填料不行。
VX:19192310212;公众号:生物技术与IVD
5楼2022-01-14 18:07:49
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龙翔桥

新虫 (小有名气)

2楼2022-01-10 20:40:00
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龙翔桥

新虫 (小有名气)

调剂一下pH,稀释一下培养基

发自小木虫Android客户端
3楼2022-01-10 20:40:29
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qwedfxcv

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你可以直接用上清发酵液去做活性实验,如果要求不高的话。我的也挂不上柱,我直接拿粗上清去做的,因为真核表达他的杂蛋白本来就很少,或者你用AKTA进行纯化试试。
4楼2022-01-14 10:50:19
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