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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 毕氏酵母表达问题
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【悬赏金币】回答本帖问题，作者liuxiaofei将赠送您 5 个金币

liuxiaofei

铁虫 (小有名气)

[求助] 毕氏酵母表达问题 已有1人参与

各位好，我用毕氏酵母表达的蛋白，载体是pIC9K，我咋目的基因的5端融合了HIS标签，培养基里面有目的蛋白，但是挂柱子就是挂不出来蛋白，这是什么原因呢？求指教，谢谢
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1楼 2022-01-10 17:31:30
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龙翔桥

新虫 (小有名气)
培养基影响吧？

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2楼2022-01-10 20:40:00
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龙翔桥

新虫 (小有名气)
调剂一下pH，稀释一下培养基

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3楼2022-01-10 20:40:29
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qwedfxcv

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你可以直接用上清发酵液去做活性实验，如果要求不高的话。我的也挂不上柱，我直接拿粗上清去做的，因为真核表达他的杂蛋白本来就很少，或者你用AKTA进行纯化试试。
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4楼2022-01-14 10:50:19
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
酵母上清比较复杂，过镍柱要进行透析或者超滤。或者用Ni Excel填料。普通填料不行。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
5楼2022-01-14 18:07:49
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