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alissawang

铁虫 (初入文坛)

[求助] siRNA敲低效率

本人最近几个月在做sirna敲低细胞内基因表达的实验。在苏州吉玛合成了3对sirna,lipo2000转染。40pm sirna用2ul lipo2000转染。4-6h后换液。48h后检测rna水平变化。检测结果没有一组敲低的,有几个浓度甚至还升高了!!!请问这是为什么?
细胞转染前密度50%左右。48h后观察细胞基本长满了孔底。
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

检查一下物种是不是对,换个细胞试一试
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2021-12-25 11:09:34
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jmqt7140

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

3楼2021-12-27 11:27:05
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alissawang

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by jmqt7140 at 2021-12-27 11:27:05
可以换个转染试剂试试呢。之前实验室的人有用一个叫英格恩的转染试剂,你可以去他们官网看看。

阳性对照成功敲低了。应该跟转染试剂无关。
4楼2021-12-27 14:38:24
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alissawang

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2021-12-25 11:09:34
检查一下物种是不是对,换个细胞试一试

物种是对的。准备尝试换另一种细胞。
5楼2021-12-27 14:39:31
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哲哲和丫丫

新虫 (初入文坛)

细胞本底的CT值是多少.如果本底就很高,大于30就别做了,做ko.或者换个公司的si,以前我们用的是北京靖瑞百康的si

发自小木虫Android客户端
6楼2021-12-30 20:16:35
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zy学无止境

新虫 (初入文坛)

加一,从文献里找了5条序列在吉玛合成的,用的锐博的转染试剂,100nM,48h后收RNA显示没有敲低效果。

发自小木虫Android客户端
7楼2022-01-06 00:42:54
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zy学无止境

新虫 (初入文坛)

楼主如果有了解决方法,恳求分享。

发自小木虫Android客户端
8楼2022-01-06 00:43:35
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