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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » siRNA敲低效率
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alissawang

铁虫 (初入文坛)

[求助] siRNA敲低效率

本人最近几个月在做sirna敲低细胞内基因表达的实验。在苏州吉玛合成了3对sirna，lipo2000转染。40pm sirna用2ul lipo2000转染。4-6h后换液。48h后检测rna水平变化。检测结果没有一组敲低的，有几个浓度甚至还升高了！！！请问这是为什么?
细胞转染前密度50%左右。48h后观察细胞基本长满了孔底。
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1楼 2021-12-24 15:25:02
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
检查一下物种是不是对，换个细胞试一试
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2021-12-25 11:09:34
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jmqt7140

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
3楼2021-12-27 11:27:05
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alissawang

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jmqt7140 at 2021-12-27 11:27:05
可以换个转染试剂试试呢。之前实验室的人有用一个叫英格恩的转染试剂，你可以去他们官网看看。

阳性对照成功敲低了。应该跟转染试剂无关。
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4楼2021-12-27 14:38:24
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alissawang

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2021-12-25 11:09:34
检查一下物种是不是对，换个细胞试一试

物种是对的。准备尝试换另一种细胞。
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5楼2021-12-27 14:39:31
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哲哲和丫丫

新虫 (初入文坛)
细胞本底的CT值是多少.如果本底就很高，大于30就别做了，做ko.或者换个公司的si，以前我们用的是北京靖瑞百康的si

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6楼2021-12-30 20:16:35
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zy学无止境

新虫 (初入文坛)
加一，从文献里找了5条序列在吉玛合成的，用的锐博的转染试剂，100nM,48h后收RNA显示没有敲低效果。

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7楼2022-01-06 00:42:54
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zy学无止境

新虫 (初入文坛)
楼主如果有了解决方法，恳求分享。

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8楼2022-01-06 00:43:35
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