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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

[交流] 请教中药样品电泳银染和样品准备的问题

最近要做一个中药样品,因为是帮别人做的,所以来源不详,成分不详,只见到样品是黄色澄清液体。
现要求先对其进行超滤处理,再page电泳,银染,拍照。
有以下几个问题不是很清楚:
1、我们购买了vivaspin 2ml的超滤管,截留大小10KD。因为样品需要原液、浓缩液和超滤液三种,所以每个样品只能超滤出部分,需要留部分用于电泳。但不晓得这种超滤管是不是很容易就会完全超滤完?这个里面有什么要注意的没有?
2、这种中药样品电泳的时候是否需要煮?大概要用多大浓度的胶?

可能我的问题有些盲目,需要我做过预实验才能确定。主要是这种中药成分不明,可能核酸、蛋白质、甾、糖都有。所以有很大的不确定性。

[ Last edited by amisking on 2010-3-6 at 20:35 ]
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

我的目的很明确,就是比较超滤前后的变化,不管是什么变化。
今天跑了两种胶,首先是上午做了常规sds-page,15%浓度,银染的结果很不乐观,marker很漂亮,但样品带模糊一片,没有任何条带,样品带就像背景色一样。我怀疑都是小分子,所以马上配制了tricine胶,15%,跑电泳,银染。结果也不乐观,也是一片,明天我去照几张照片。
不知道是什么原因。
我怀疑是样品的问题。首先样品可能不是蛋白质或核酸,或不含这两种。而是糖类或缁类或其他。不知道糖类等用银染的方法能不能检测?
我闻那个送过来的样品,感觉就像止咳糖浆。中药就是这个样子吗?任何东西都不明确,让人怎么敢吃?
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9楼2009-08-27 20:27:41
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

自己顶。
据说这种超滤管有死停功能,那么其死停后剩下的浓缩液体积大概能有多少?
我主要是怕超干了。我加1ml的样进去,最少得留200ul吧,我要跑电泳的。
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2楼2009-08-25 19:31:05
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
amisking(金币+3,VIP+0):为你的执着给个红包! 8-25 20:30
自己顶。
据说这种超滤管有死停功能,那么其死停后剩下的浓缩液体积大概能有多少?
我主要是怕超干了。我加1ml的样进去,最少得留200ul吧,我要跑电泳的。
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3楼2009-08-25 19:31:38
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liujunhero

新虫 (文学泰斗)

文献杰出贡献文献杰出贡献


snoopyzxx(金币+1):谢谢参与
那你做电泳的主要目的是什么呢,样品太复杂了,跑出来根本没意义的啊
4楼2009-08-25 20:21:44
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