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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教中药样品电泳银染和样品准备的问题
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

[交流] 请教中药样品电泳银染和样品准备的问题

最近要做一个中药样品，因为是帮别人做的，所以来源不详，成分不详，只见到样品是黄色澄清液体。
现要求先对其进行超滤处理，再page电泳，银染，拍照。
有以下几个问题不是很清楚：
1、我们购买了vivaspin 2ml的超滤管，截留大小10KD。因为样品需要原液、浓缩液和超滤液三种，所以每个样品只能超滤出部分，需要留部分用于电泳。但不晓得这种超滤管是不是很容易就会完全超滤完？这个里面有什么要注意的没有？
2、这种中药样品电泳的时候是否需要煮？大概要用多大浓度的胶？

可能我的问题有些盲目，需要我做过预实验才能确定。主要是这种中药成分不明，可能核酸、蛋白质、甾、糖都有。所以有很大的不确定性。

[ Last edited by amisking on 2010-3-6 at 20:35 ]
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1楼 2009-08-25 18:59:24
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
自己顶。
据说这种超滤管有死停功能，那么其死停后剩下的浓缩液体积大概能有多少？
我主要是怕超干了。我加1ml的样进去，最少得留200ul吧，我要跑电泳的。
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2楼2009-08-25 19:31:05
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
amisking(金币+3,VIP+0):为你的执着给个红包！ 8-25 20:30
自己顶。
据说这种超滤管有死停功能，那么其死停后剩下的浓缩液体积大概能有多少？
我主要是怕超干了。我加1ml的样进去，最少得留200ul吧，我要跑电泳的。
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3楼2009-08-25 19:31:38
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liujunhero

新虫 (文学泰斗)

文献杰出贡献文献杰出贡献
★
snoopyzxx(金币+1):谢谢参与
那你做电泳的主要目的是什么呢，样品太复杂了，跑出来根本没意义的啊
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4楼2009-08-25 20:21:44
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amisking

荣誉版主 (文坛精英)

优秀区长优秀版主
★
snoopyzxx(金币+1):谢谢参与
帮你顶！
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如果没有人帮助你，那么你就去帮助别人。
5楼2009-08-25 20:30:31
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by liujunhero at 2009-8-25 20:21:
那你做电泳的主要目的是什么呢，样品太复杂了，跑出来根本没意义的啊

做电泳的目的就是看超滤前后有没有什么变化，所以就需要超滤前的样品，超滤后的样品和超滤出来的液体三部分一起电泳。好像是要做标准的。
中药的东西我也不懂。
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6楼2009-08-25 20:47:38
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tanlaixun

禁言 (知名作家)
★
snoopyzxx(金币+1):谢谢参与
本帖内容被屏蔽
7楼2009-08-27 00:14:05
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蓝皮鼠7983

至尊木虫 (文坛精英)

飞过蓝天
★
snoopyzxx(金币+1):谢谢参与
你把目的明确下,然后再好好设计实验
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海到尽头天做岸，山登绝顶我为峰。
8楼2009-08-27 00:32:05
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
我的目的很明确，就是比较超滤前后的变化，不管是什么变化。
今天跑了两种胶，首先是上午做了常规sds-page，15%浓度，银染的结果很不乐观，marker很漂亮，但样品带模糊一片，没有任何条带，样品带就像背景色一样。我怀疑都是小分子，所以马上配制了tricine胶，15%，跑电泳，银染。结果也不乐观，也是一片，明天我去照几张照片。
不知道是什么原因。
我怀疑是样品的问题。首先样品可能不是蛋白质或核酸，或不含这两种。而是糖类或缁类或其他。不知道糖类等用银染的方法能不能检测？
我闻那个送过来的样品，感觉就像止咳糖浆。中药就是这个样子吗？任何东西都不明确，让人怎么敢吃？
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9楼2009-08-27 20:27:41
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louyiceng
★
snoopyzxx(金币+1):谢谢参与
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10楼2010-03-06 20:21:58
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