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空盖子

铜虫 (初入文坛)

[交流] 包涵体的提取

大家好,我现在的问题是想跑蛋白,将菌体的所有蛋白都拿到然后跑电泳,但是可能我的蛋白表达后以包涵体的形式存在,我怎么能让所有的蛋白都溶解呢
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mango70803575

银虫 (小有名气)

试试用变性剂(如8M尿素)溶解,然后再复性吧!
过去的一切等于零,现在的一切从零开始!
2楼2009-08-25 18:21:25
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
同意楼上~但必须查询相关文献~
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2009-08-25 19:44:14
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x8q4h11

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
跑电泳不用提取包涵体的   用菌液直接做变性电泳   蛋白条带就都可以出来了
4楼2009-08-25 21:35:46
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anik

银虫 (正式写手)

你找下关于蛋白分离的实验手册,上面有怎么变化条件尽量使蛋白的表达分泌在溶液中。

如果实在不能溶解的话,也不要紧,将细胞破碎(超声波法),离心,取沉淀,然后用PBS溶解,上样电泳即可。
5楼2009-08-25 22:12:36
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pumas2006

铁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果只是检测总蛋白,那么就可以用菌液做。若是想得到纯的单一蛋白,最好对蛋白质变性然后复性,这些你都得查阅相关资料,确定条件。
6楼2009-08-26 07:36:36
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空盖子

铜虫 (初入文坛)

我的方法是菌液离心,去掉上清,然后加蛋白提取液,重悬,再煮10分钟,离心取上清点样
7楼2009-08-26 10:55:52
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baiyidao

金虫 (小有名气)


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呵呵,那你的不是包涵体啦,
8楼2009-09-07 18:34:36
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wrb456

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
直接沸水浴15分钟就行了!
9楼2009-09-11 23:05:56
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
表达后跑电泳有几个目的:一是看有没有表达;二是看以什么形式表达:可溶性or包涵体。
这可以通过一次电泳判断出来。
你可以取少量,几ml就够了。超声破菌后离心,分别收集上清和沉淀,沉淀用适量水或PBS悬浮(悬浮起来就可以了,不用溶解。用枪吹打几下就可以了)。
电泳前加sample buffer,沸水煮5min。
将上清和沉淀、未诱导一起跑电泳,就可以达到上述两个目的了。然后根据电泳结果来设计接下来的实验:重新诱导还是纯化,可溶性还是包涵体纯化。
生物资源交流QQ群:1044518333
10楼2009-09-11 23:50:23
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