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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 包涵体的提取
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空盖子

铜虫 (初入文坛)

[交流] 包涵体的提取

大家好，我现在的问题是想跑蛋白，将菌体的所有蛋白都拿到然后跑电泳，但是可能我的蛋白表达后以包涵体的形式存在，我怎么能让所有的蛋白都溶解呢
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1楼 2009-08-25 16:56:16
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mango70803575

银虫 (小有名气)
试试用变性剂（如8M尿素）溶解，然后再复性吧！
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过去的一切等于零，现在的一切从零开始！
2楼2009-08-25 18:21:25
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
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同意楼上~但必须查询相关文献~
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2009-08-25 19:44:14
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x8q4h11

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
跑电泳不用提取包涵体的   用菌液直接做变性电泳   蛋白条带就都可以出来了
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4楼2009-08-25 21:35:46
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anik

银虫 (正式写手)
你找下关于蛋白分离的实验手册，上面有怎么变化条件尽量使蛋白的表达分泌在溶液中。

如果实在不能溶解的话，也不要紧，将细胞破碎（超声波法），离心，取沉淀，然后用PBS溶解，上样电泳即可。
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5楼2009-08-25 22:12:36
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pumas2006

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果只是检测总蛋白，那么就可以用菌液做。若是想得到纯的单一蛋白，最好对蛋白质变性然后复性，这些你都得查阅相关资料，确定条件。
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6楼2009-08-26 07:36:36
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空盖子

铜虫 (初入文坛)
我的方法是菌液离心，去掉上清，然后加蛋白提取液，重悬，再煮10分钟，离心取上清点样
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7楼2009-08-26 10:55:52
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baiyidao

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
呵呵，那你的不是包涵体啦，
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8楼2009-09-07 18:34:36
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wrb456

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
直接沸水浴15分钟就行了！
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9楼2009-09-11 23:05:56
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
表达后跑电泳有几个目的：一是看有没有表达；二是看以什么形式表达：可溶性or包涵体。
这可以通过一次电泳判断出来。
你可以取少量，几ml就够了。超声破菌后离心，分别收集上清和沉淀，沉淀用适量水或PBS悬浮（悬浮起来就可以了，不用溶解。用枪吹打几下就可以了）。
电泳前加sample buffer，沸水煮5min。
将上清和沉淀、未诱导一起跑电泳，就可以达到上述两个目的了。然后根据电泳结果来设计接下来的实验：重新诱导还是纯化，可溶性还是包涵体纯化。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
10楼2009-09-11 23:50:23
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