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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 截短质粒转染成功但不表达
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wealjehh

新虫 (初入文坛)

[求助] 截短质粒转染成功但不表达 已有1人参与

我最近在做一个A和B蛋白相互作用的关系，构建了B的全长和两个截短质粒，我分别把这三个片段都构在过表达载体上，做WB检测，发现全长和前半段可以正常表达，后半段不表达，质粒测序是正确的，检测了mRNA水平是升高的，换了不同的载体和标签也还是不表达，有没有大神可以指点迷津啊

@hc-material @gyesang 发自小木虫Android客户端
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1楼 2021-12-06 12:11:00
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秋桐木

新虫 (初入文坛)
要不要检查外源片段连没连上

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4楼2021-12-14 13:30:42
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
说明截断以后的蛋白不能正确折叠了，大概率你后半段的截断太多无结构区域，或者把一个完整的结构域给劈成两半了
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wealjehh
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2021-12-07 10:18:46
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wealjehh

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2021-12-07 10:18:46
说明截断以后的蛋白不能正确折叠了，大概率你后半段的截断太多无结构区域，或者把一个完整的结构域给劈成两半了

谢谢，我还有一点不太明白。这个蛋白一共有四个结构域，我的后半段包括了后面三个，这样能通过什么方式帮助蛋白折叠吗？我在文献里见到有人这么截的，也是能正确表达的，所以结构域应该是完整的吧

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3楼2021-12-07 23:15:50
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