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wealjehh

新虫 (初入文坛)

[求助] 截短质粒转染成功但不表达 已有1人参与

我最近在做一个A和B蛋白相互作用的关系,构建了B的全长和两个截短质粒,我分别把这三个片段都构在过表达载体上,做WB检测,发现全长和前半段可以正常表达,后半段不表达,质粒测序是正确的,检测了mRNA水平是升高的,换了不同的载体和标签也还是不表达,有没有大神可以指点迷津啊

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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
说明截断以后的蛋白不能正确折叠了,大概率你后半段的截断太多无结构区域,或者把一个完整的结构域给劈成两半了

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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2021-12-07 10:18:46
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wealjehh

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2021-12-07 10:18:46
说明截断以后的蛋白不能正确折叠了,大概率你后半段的截断太多无结构区域,或者把一个完整的结构域给劈成两半了

谢谢,我还有一点不太明白。这个蛋白一共有四个结构域,我的后半段包括了后面三个,这样能通过什么方式帮助蛋白折叠吗?我在文献里见到有人这么截的,也是能正确表达的,所以结构域应该是完整的吧

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3楼2021-12-07 23:15:50
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秋桐木

新虫 (初入文坛)

要不要检查外源片段连没连上

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4楼2021-12-14 13:30:42
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