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honglix

银虫 (正式写手)

[交流] 请教:接头连接是否会在表达产物中引入所需克隆外的氨基酸?

在克隆DNA两端引入接头时,是否会在其表达产物中加入额外的氨基酸?引入的接头如果碱基数是除以3后余2个或1个碱基时,是否会引起翻译时的移码而表达出所不需要的产物?若是,怎样消除;如不是,是什么原因?
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panacea007

银虫 (小有名气)


honglix(金币+1,VIP+0): 8-25 20:47
看看你用什么表达体系,以及怎么表达了。

如果用E. coli做胞内表达,就不存在这个问题,因为你会加一个起始密码子,酶切位点应该在起始密码子外,不会翻译。

如果用Pichia pastoris 做胞外表达, 加入不合适的酶切位点肯定会引起表达,因为你的基因肯定是连在信号肽后面,而表达是从信号肽开始的。

选择多克隆位点的酶切位点 一般不会移码突变,自己看看就是了。

[ Last edited by panacea007 on 2009-8-25 at 15:06 ]
4楼2009-08-25 15:05:32
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)


honglix(金币+1,VIP+0): 8-25 20:46
所谓接头,只是在克隆时起连接作用的,它是位于启动子和终止子之外的,所以是不会翻译的。只有位于启动子和终止子之间的部分在表达时才被翻译。
生物资源交流QQ群:1044518333
2楼2009-08-25 13:30:44
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


honglix(金币+1,VIP+0): 8-25 20:46
从起始密码子向前3个3个推就行,引入酶切位点如果不注意就会移码。
Thank-you,so-blue.
3楼2009-08-25 14:55:50
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honglix

银虫 (正式写手)

如果是想在一个蛋白端连接另一短肽,怎样顺利接上不引起蛋白质功能变化
6楼2009-08-25 20:56:54
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