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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 普通pcr有目标条带，高保真酶扩不出来
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虾须镯

新虫 (小有名气)

[求助] 普通pcr有目标条带，高保真酶扩不出来 已有2人参与

670bp左右的基因，44%  GC，普通pcr退火温度是60.5，延伸时间设置45s，然后高保真酶的退火和延伸和普通pcr一致，结果全是弥散带，老板让我稀释底物，稀释后跑了一次就没跑出东西，救救孩子吧，真的很中意这个基因

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1楼 2021-11-30 23:00:28
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VNGVNGVNG

铁虫 (初入文坛)
普通pcr产物测个序，看看是不是正确的序列

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5楼2021-12-01 21:20:22
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YU_DG

木虫 (正式写手)
670bp，就用普通pcr做呗，多测几个序就可以了，一般都会得到无突变的克隆的

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2楼2021-12-01 00:12:12
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shuaibia6

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议在60.5上下5℃做个梯度
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3楼2021-12-01 09:10:55
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elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做个梯度，可能是你的退火温度太高了
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4楼2021-12-01 11:33:02
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