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虾须镯

新虫 (小有名气)

[求助] 普通pcr有目标条带,高保真酶扩不出来 已有2人参与

670bp左右的基因,44%  GC,普通pcr退火温度是60.5,延伸时间设置45s,然后高保真酶的退火和延伸和普通pcr一致,结果全是弥散带,老板让我稀释底物,稀释后跑了一次就没跑出东西,救救孩子吧,真的很中意这个基因

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shuaibia6

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议在60.5上下5℃做个梯度
3楼2021-12-01 09:10:55
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YU_DG

木虫 (正式写手)

670bp,就用普通pcr做呗,多测几个序就可以了,一般都会得到无突变的克隆的

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2楼2021-12-01 00:12:12
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elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
做个梯度,可能是你的退火温度太高了
4楼2021-12-01 11:33:02
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VNGVNGVNG

铁虫 (初入文坛)

普通pcr产物测个序,看看是不是正确的序列

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5楼2021-12-01 21:20:22
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