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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 载体构建
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果茶屁

新虫 (初入文坛)

[求助] 载体构建 已有2人参与

做载体构建的时候，酶切和PCR都验证过了，对的，为什么送测序的时候，测序的结果都不对，一直想不明白

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1楼 2021-11-25 10:23:18
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shuaibia6

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的目的片段没有完全结合在载体上。你的目的片段是不是偏大载体偏小
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2楼2021-11-25 10:29:59
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longanzz

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR是用什么引物做的，是基因引物吗？最好再用载体引物和基因引物搭配扩增，如果有带，那还差不多链接上了。
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3楼2021-11-25 11:46:33
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zhangcarlm

木虫 (著名写手)
选一段目的片段中间位置的序列做引物，做测序。

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4楼2021-11-25 12:21:11
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果茶屁

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shuaibia6 at 2021-11-25 10:29:59
你的目的片段没有完全结合在载体上。你的目的片段是不是偏大载体偏小

目的基因1800bp,载体是一万多bp

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5楼2021-11-25 14:33:43
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果茶屁

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by longanzz at 2021-11-25 11:46:33
PCR是用什么引物做的，是基因引物吗？最好再用载体引物和基因引物搭配扩增，如果有带，那还差不多链接上了。

pcr用的克隆时的引物验证的

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6楼2021-11-25 14:34:24
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果茶屁

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhangcarlm at 2021-11-25 12:21:11
选一段目的片段中间位置的序列做引物，做测序。

我去试一下，谢谢啦

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7楼2021-11-25 14:51:54
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tjj451679479

新虫 (小有名气)
我纯粹凑个热闹，扩培构建好的载体，提取质粒后直接切下目的片段送测序。
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8楼2021-11-25 16:46:16
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