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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR不出结果
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xmch0420

银虫 (小有名气)

[求助] PCR不出结果 已有1人参与

介绍一下大致情况
1.HLA基因分型实验，就做了普通扩增，送出去测序；
2.HLA-A和B之前是出的，然后什么条件都没改变，试剂也是新开的，dna质量也是1.8~2.0，最近做就不出了；
3.今天晚上将buffer从A换成了GC，做了平行实验，刚开始做bufferGC出了产物，A出了一个样本，然后我又重复一遍实验，两个都没出。。。。、
4.不知道怎么办了，就什么都没变就不出产物。有理由怀疑是玄学
不知道怎么上传图。。可能是浏览器不匹配
大佬帮忙看看!!!
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1楼 2021-11-20 21:00:39
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xmch0420

银虫 (小有名气)
链接：https://pan.baidu.com/s/1xoivyOdLUZt5pJD_Jks2pQ
提取码：1234
把图放网盘里面了，各位大佬看一下啊！！
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2楼2021-11-20 21:03:17
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel
建议你重新提取模板，不知道你为什么都试了，就不注意一下模板DNA序列是否还正确

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奋斗是我们前进的动力！
3楼2021-11-20 22:18:14
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xmch0420

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xn8008 at 2021-11-20 22:18:14
建议你重新提取模板，不知道你为什么都试了，就不注意一下模板DNA序列是否还正确

用了新提取的DNA，浓度纯度都合格，也不行
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4楼2021-11-21 09:42:49
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fengxueren

新虫 (正式写手)
DNA电泳，看模板真实情况。检测引物是否正确，模板是否准确？

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5楼2021-11-22 01:51:25
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shuaibia6

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
增加循环数试试。11111111111111111111111
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6楼2021-11-22 09:07:59
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xmch0420

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by shuaibia6 at 2021-11-22 09:07:59
增加循环数试试。11111111111111111111111

那个程序都是稳定的，跑其他的基因就可以，是我老师博士的时候用的程序

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7楼2021-11-22 13:16:24
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shuaibia6

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xmch0420 at 2021-11-22 13:16:24
那个程序都是稳定的，跑其他的基因就可以，是我老师博士的时候用的程序
...

怎么这么死脑筋呢，你换换试试嘛
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8楼2021-11-22 15:13:20
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shuaibia6

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xmch0420 at 2021-11-22 13:16:24
那个程序都是稳定的，跑其他的基因就可以，是我老师博士的时候用的程序
...

我听你这个意思，你任何引物都用这个固定的程序，循环数和退火温度，延伸时间从不去考虑的？那你以前能扩增出来真是老天保佑了哦
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9楼2021-11-22 15:22:58
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xmch0420

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by shuaibia6 at 2021-11-22 15:22:58
我听你这个意思，你任何引物都用这个固定的程序，循环数和退火温度，延伸时间从不去考虑的？那你以前能扩增出来真是老天保佑了哦...

不是的，扩增的就那两个基因，中间有调整过，这是调整最后稳定的一个程序

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10楼2021-11-22 15:40:12
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