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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR求助，急！
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suzzan

银虫 (小有名气)

[交流] PCR求助，急！

请问各位高手，我这个PCR结果是什么原因啊，都出现过多次了，
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热爱生活，才会被生活所爱
1楼 2009-08-24 13:39:25
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
★
amisking(金币+1,VIP+0): 8-24 19:12
......很奇怪的PCR结果啊，看不太明白。试剂有问题没？
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2楼2009-08-24 13:43:12
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-24 19:12
引物特异性不好，酶、Mg浓度太高，模板量太大
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3楼2009-08-24 13:47:54
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j2

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-24 19:12
你作个阴性对照看看是什么样子的，如果阴性对照跟这些一样，试剂问题，且没P出来，如果阴性对照无条带就考虑模板问题及优化PCR反应条件
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
4楼2009-08-24 13:48:09
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wangqk198738

金虫 (正式写手)

一点都不奇怪

★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+4,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-24 19:12
你的退火温度是多少啊？从这方面着手，你应当试过最高温度了，找个最低温度试试看，用你的最高温度减去十度，还是没有，就减掉五度，一试就知道了。两个区间应该有东西出来的。一次是不够的，至少把每个温度都是过了，才能有最好的效果出现，也不知道你说的“多次”是多少次，应该是就几次吧，我每次都是十好几次，慢慢来会有好结果的。前提条件是你的试剂都没问题。祝好！
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5楼2009-08-24 13:50:01
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wangqk198738

金虫 (正式写手)
★ ★
司马诸葛(金币+2,VIP+0):谢谢交流 8-24 15:52
引用回帖:
Originally posted by holyala at 2009-8-24 13:43:
......很奇怪的PCR结果啊，看不太明白。试剂有问题没？

同意这个楼主说的，模板的量肯定是多了些，不然泳道不会这么亮。
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6楼2009-08-24 13:51:21
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beisimai895

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
感觉像什么都P出来似的,没有条带,也不像弥散,好像引物二聚体的样子,重新优化一下体系看看如何.
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7楼2009-08-24 15:32:34
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suzzan

银虫 (小有名气)
前段时间换了下酶就做出来了，又一支没就又成这样了呢，奇怪的是其他人用我这个酶做都有东西的，
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热爱生活，才会被生活所爱
8楼2009-08-24 15:56:00
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suzzan

银虫 (小有名气)
四楼的朋友你也出现过这样的情况吗？这样是退火温度高了嘛？我做的是甜槠，已经有人做过优化了，退火温度是56.5，我现在用的是55，比那个还低了点呢，
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热爱生活，才会被生活所爱
9楼2009-08-24 15:59:47
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suzzan

银虫 (小有名气)
六楼的朋友说像引物二聚体，但是引物二聚体应该在溴芬蓝之前的啊，这个在后面呢，模板量也与这个有关吗》？
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热爱生活，才会被生活所爱
10楼2009-08-24 16:02:39
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