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suzzan

银虫 (小有名气)

[交流] PCR求助,急!

请问各位高手,我这个PCR结果是什么原因啊,都出现过多次了,
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家


amisking(金币+1,VIP+0): 8-24 19:12
......很奇怪的PCR结果啊,看不太明白。试剂有问题没?
2楼2009-08-24 13:43:12
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 8-24 19:12
引物特异性不好,酶、Mg浓度太高,模板量太大
3楼2009-08-24 13:47:54
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j2

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 8-24 19:12
你作个阴性对照看看是什么样子的,如果阴性对照跟这些一样,试剂问题,且没P出来,如果阴性对照无条带就考虑模板问题及优化PCR反应条件
修炼ing,当虫仙……
4楼2009-08-24 13:48:09
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wangqk198738

金虫 (正式写手)

一点都不奇怪

★ ★ ★ ★ ★
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amisking(金币+4,VIP+0):欢迎发帖交流! 8-24 19:12
你的退火温度是多少啊?从这方面着手,你应当试过最高温度了,找个最低温度试试看,用你的最高温度减去十度,还是没有,就减掉五度,一试就知道了。两个区间应该有东西出来的。一次是不够的,至少把每个温度都是过了,才能有最好的效果出现,也不知道你说的“多次”是多少次,应该是就几次吧,我每次都是十好几次,慢慢来会有好结果的。前提条件是你的试剂都没问题。祝好!
5楼2009-08-24 13:50:01
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wangqk198738

金虫 (正式写手)

★ ★
司马诸葛(金币+2,VIP+0):谢谢交流 8-24 15:52
引用回帖:
Originally posted by holyala at 2009-8-24 13:43:
......很奇怪的PCR结果啊,看不太明白。试剂有问题没?

同意这个楼主说的,模板的量肯定是多了些,不然泳道不会这么亮。
6楼2009-08-24 13:51:21
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beisimai895

木虫 (小有名气)


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感觉像什么都P出来似的,没有条带,也不像弥散,好像引物二聚体的样子,重新优化一下体系看看如何.
7楼2009-08-24 15:32:34
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suzzan

银虫 (小有名气)

前段时间换了下酶就做出来了,又一支没就又成这样了呢,奇怪的是其他人用我这个酶做都有东西的,
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8楼2009-08-24 15:56:00
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suzzan

银虫 (小有名气)

四楼的朋友你也出现过这样的情况吗?这样是退火温度高了嘛?我做的是甜槠,已经有人做过优化了,退火温度是56.5,我现在用的是55,比那个还低了点呢,
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9楼2009-08-24 15:59:47
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suzzan

银虫 (小有名气)

六楼的朋友说像引物二聚体,但是引物二聚体应该在溴芬蓝之前的啊,这个在后面呢,模板量也与这个有关吗》?
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10楼2009-08-24 16:02:39
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