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咸鱼披萨

新虫 (小有名气)

[求助] 关于酵母系统蛋白质纯化表达，载体以及表达细胞株选择 已有1人参与

有一个植物蛋白想要表达纯化出来，是一个分泌型核酸酶，目标是大量纯化后再进行功能检验。
打算用真核酵母系统表达，因为第一次做蛋白表达，有很多问题。想问下：
1.载体应该是选择pPICZαA还是pPIC9k，
2.另外关于酵母感受态。应该选择GS115还是KM71，
3.还有目标片段插入位置的选择有什么讲究，
4.目标蛋白本身有信号肽，在插入时需要去除吗
5.pPICZαA有HIS标签可以用于蛋白纯化吗，网上的pPIC9k-his也可以吧，现在纠结这两个怎么选择
后续在做的时候可能还有其他问题，希望能得到解答，谢谢@hc-material@gyesang
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1楼 2021-11-10 18:51:11
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咸鱼披萨

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by snoopyzxx at 2021-11-14 13:31:44
如果没有做过，首选pPIC9K+GS115组合。
pPICZaA是zeocin抗性，抗生素比较贵，筛选相对要难一些。
pPIC9k不管是构建还是筛选多拷贝，都要简单很多。

至于菌种，pPIC9k只能用His-的酵母，所以选择比较有限。KM71 ...

太谢谢您了
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3楼2021-11-16 10:56:31
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

如果没有做过，首选pPIC9K+GS115组合。
pPICZaA是zeocin抗性，抗生素比较贵，筛选相对要难一些。
pPIC9k不管是构建还是筛选多拷贝，都要简单很多。

至于菌种，pPIC9k只能用His-的酵母，所以选择比较有限。KM71主要用于Mut-表型。

his标签，可以自己加在目的蛋白的C端。不建议加在N端。
信号肽优选pPIC9k自带的信号肽，不用基因本身的信号肽，需要去除。
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咸鱼披萨
生物资源交流QQ群：1044518333
2楼2021-11-14 13:31:44
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_草莓圣代_

新虫 (初入文坛)
请问楼主现在做的怎么样了呀，我刚刚开始接触这部分，方便加个微信请教一下您吗^_^
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4楼2022-06-09 13:21:32
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