应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 关于酵母系统蛋白质纯化表达，载体以及表达细胞株选择
41/1返回列表
查看: 1692  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者咸鱼披萨将赠送您 50 个金币

咸鱼披萨

新虫 (小有名气)

[求助] 关于酵母系统蛋白质纯化表达，载体以及表达细胞株选择 已有1人参与

有一个植物蛋白想要表达纯化出来，是一个分泌型核酸酶，目标是大量纯化后再进行功能检验。
打算用真核酵母系统表达，因为第一次做蛋白表达，有很多问题。想问下：
1.载体应该是选择pPICZαA还是pPIC9k，
2.另外关于酵母感受态。应该选择GS115还是KM71，
3.还有目标片段插入位置的选择有什么讲究，
4.目标蛋白本身有信号肽，在插入时需要去除吗
5.pPICZαA有HIS标签可以用于蛋白纯化吗，网上的pPIC9k-his也可以吧，现在纠结这两个怎么选择
后续在做的时候可能还有其他问题，希望能得到解答，谢谢@hc-material@gyesang
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2021-11-10 18:51:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

如果没有做过，首选pPIC9K+GS115组合。
pPICZaA是zeocin抗性，抗生素比较贵，筛选相对要难一些。
pPIC9k不管是构建还是筛选多拷贝，都要简单很多。

至于菌种，pPIC9k只能用His-的酵母，所以选择比较有限。KM71主要用于Mut-表型。

his标签，可以自己加在目的蛋白的C端。不建议加在N端。
信号肽优选pPIC9k自带的信号肽，不用基因本身的信号肽，需要去除。
赞一下(2人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

咸鱼披萨
VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
2楼2021-11-14 13:31:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

咸鱼披萨

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by snoopyzxx at 2021-11-14 13:31:44
如果没有做过，首选pPIC9K+GS115组合。
pPICZaA是zeocin抗性，抗生素比较贵，筛选相对要难一些。
pPIC9k不管是构建还是筛选多拷贝，都要简单很多。

至于菌种，pPIC9k只能用His-的酵母，所以选择比较有限。KM71 ...

太谢谢您了
回复此楼
3楼2021-11-16 10:56:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

_草莓圣代_

新虫 (初入文坛)
请问楼主现在做的怎么样了呀，我刚刚开始接触这部分，方便加个微信请教一下您吗^_^
赞一下 回复此楼
4楼2022-06-09 13:21:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 咸鱼披萨 的主题更新
41/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 8/400 2026-09-02 02:42 by Leogzhya
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗？ +4 瞬息宇宙 2026-08-31 4/200 2026-09-01 14:58 by jiaoxg
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 基金不中，共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭