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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » GTC法提取细胞总RNA过程中每个试剂的作用是什么？
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zhangn516

[交流] GTC法提取细胞总RNA过程中每个试剂的作用是什么？

将β巯基乙醇+2M NaAc加入GTC裂解的细胞悬液中，混匀，加入酸酚和氯仿，混匀离心，再加氯仿和上清，混匀离心，再加异丙醇过夜沉淀。
这其中每一步试剂的作用有人能给一一介绍一下嘛？谢谢。。。

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-4 at 10:13 ]
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1楼 2009-08-23 21:15:18
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xiaolei8555

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
sutao1979(金币+1,VIP+0): 8-24 03:11
zhangn516(金币+1,VIP+0): 8-24 09:20
β巯基乙醇-抗氧化；2M NaAc-不清楚；酸酚和氯仿-去除DNA、蛋白和多糖等杂质；

氯仿-去除酸酚；异丙醇-沉淀RNA
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2楼2009-08-23 23:22:26
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★
zhangn516(金币+1,VIP+0): 8-24 09:20
2M NaAc一个作用是调节ph值（大约PH=4左右），一个是沉淀疏水性的DNA的吧；酸酚和氯仿使蛋白变性同时使之沉淀（离心）；氯仿是为了减少RNA的损失同时去除蛋白残余；异丙醇是用来沉淀DNA(亲水性)和RNA的（最后要加DNAase去除DNA）
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会当凌绝顶，一览众山小
3楼2009-08-24 03:54:20
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zhangn516

β巯基乙醇抗氧化是用来做什么的？抑制RNase的活性吗？
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4楼2009-08-24 09:22:02
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
引用回帖:
Originally posted by zhangn516 at 2009-8-24 09:22:
β巯基乙醇抗氧化是用来做什么的？抑制RNase的活性吗？

----完全正确，但是其他作用应当是抑制多酚和色素酶的活性
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会当凌绝顶，一览众山小
5楼2009-08-24 16:26:13
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