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zhangn516

[交流] GTC法提取细胞总RNA过程中每个试剂的作用是什么?

将β巯基乙醇+2M NaAc加入GTC裂解的细胞悬液中,混匀,加入酸酚和氯仿,混匀离心,再加氯仿和上清,混匀离心,再加异丙醇过夜沉淀。
这其中每一步试剂的作用有人能给一一介绍一下嘛?谢谢。。。

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-4 at 10:13 ]
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xiaolei8555

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
sutao1979(金币+1,VIP+0): 8-24 03:11
zhangn516(金币+1,VIP+0): 8-24 09:20
β巯基乙醇-抗氧化;2M NaAc-不清楚;酸酚和氯仿-去除DNA、蛋白和多糖等杂质;

氯仿-去除酸酚;异丙醇-沉淀RNA
2楼2009-08-23 23:22:26
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader


zhangn516(金币+1,VIP+0): 8-24 09:20
2M NaAc一个作用是调节ph值(大约PH=4左右),一个是沉淀疏水性的DNA的吧;酸酚和氯仿使蛋白变性同时使之沉淀(离心);氯仿是为了减少RNA的损失同时去除蛋白残余;异丙醇是用来沉淀DNA(亲水性)和RNA的(最后要加DNAase去除DNA)
会当凌绝顶,一览众山小
3楼2009-08-24 03:54:20
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zhangn516

β巯基乙醇抗氧化是用来做什么的?抑制RNase的活性吗?
4楼2009-08-24 09:22:02
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

引用回帖:
Originally posted by zhangn516 at 2009-8-24 09:22:
β巯基乙醇抗氧化是用来做什么的?抑制RNase的活性吗?

----完全正确,但是其他作用应当是抑制多酚和色素酶的活性
会当凌绝顶,一览众山小
5楼2009-08-24 16:26:13
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