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Siw

新虫 (初入文坛)

[求助] EMSA验证-蛋白与探针结合条带弥散 已有1人参与

大家好,我最近做一个调控子与基因启动子之间的相互作用,EMSA验证。现在纯化了蛋白,与荧光标记探针作用,通过提高蛋白浓度发现其与基因有结合,但结合条带非常弥散,有没有能帮我看看怎么回事?我已经优化了binding 条件,但是条带还是弥散。蛋白是加入了ul,不是ml。且蛋白浓度是2.1mg/ml。

EMSA验证-蛋白与探针结合条带弥散


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subjective

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by pennchem at 2021-10-21 16:47:00
非变性胶? 电泳控制发热,复合物容易解离

请问,我的蛋白pi是5.7,做emsa,用的1×tbe,缓冲液,跑完后,只有没有加蛋白的有条带,加蛋白的没有条带,或者是弥散的条带(很不清楚),这个是因为我缓冲液PH的问题吗,但我又看网上说,不需要考虑蛋白pi,是的吗?

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5楼2022-03-08 22:18:21
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查看全部 6 个回答

聆蝶漫澄

新虫 (正式写手)

2楼2021-10-21 15:15:09
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
非变性胶? 电泳控制发热,复合物容易解离
行至水穷处,坐看云起时
3楼2021-10-21 16:47:00
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subjective

新虫 (小有名气)

你好,请问你解决你的问题了吗,我最近也在做这个,但是我加了蛋白的组连条带都没有,用的6%的非变性胶,1×tbe,我的蛋白pi是5.7,是不是因为蛋白被卡主了,跑不出来,还是有其他的什么问题

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4楼2022-03-08 22:15:21
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