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chase771

金虫 (小有名气)

[交流] [交流求助]POD 酶测定温度

测植物POD时,酶液加入到反应液中后,是否要保温一段时间,温度多少,多长时间?
愈创木酚法测定时是不是颜色变化的很快,一般测得的酶活大概在什么范围内?我做的时候OD值怎么每分钟才变化0.00几?

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-19 at 12:48 ]
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chase771

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by like8866 at 2009-8-26 10:00:
我没保温过,测的数据也还行,难道还用保温吗?

请问您侧的时候,就有明显的颜色变化了吗
4楼2009-08-26 14:07:31
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
测植物POD时,酶液加入到反应液中后,是否要保温一段时间,温度多少,多长时间?

一般保温5min。但是这要看你的 反应液初始温度 和 反应温度 相差多少度的。这实际上是需要你用温度计在比色皿中测定的(测定时跟实际反应操作要一致!)。

对于1CM 石英比色皿,装满3 mL 的溶液,在光度计中保温时,从室温升高至37℃ 需要大约5min。但如果水浴的话,也就1min。这个我测过。

你查文献,看看一般的POD测定用多少温度,你就用多少温度好了。但最好测定2℃波动范围对POD活性的影响,这样,即使温度有波动,你心里也有数啊



愈创木酚法测定时是不是颜色变化的很快,一般测得的酶活大概在什么范围内?我做的时候OD值怎么每分钟才变化0.00几?

酶活在什么范围比较准确,这需要你加不同量的POD来做其线性范围。例如在2-50uL POD酶液时,吸光值的变化速率为0.002-0.05/min ,曲线呈较好的线性,这说明,以后你只能在吸光值的变化速率为0.002-0.05/min 范围内测定。

意思就是,你如果反应时间为2min,测定的吸光值变化为0.4, 那么你的酶活测定数据是错的!
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
2楼2009-08-23 09:39:47
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like8866


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我没保温过,测的数据也还行,难道还用保温吗?
3楼2009-08-26 10:00:00
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