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[交流求助]POD 酶测定温度
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测植物POD时，酶液加入到反应液中后，是否要保温一段时间，温度多少，多长时间？ 愈创木酚法测定时是不是颜色变化的很快，一般测得的酶活大概在什么范围内？我做的时候OD值怎么每分钟才变化0.00几? [ Last edited by 350784478 on 2009-9-19 at 12:48 ] |
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HarveyWang
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测植物POD时，酶液加入到反应液中后，是否要保温一段时间，温度多少，多长时间？ 一般保温5min。但是这要看你的 反应液初始温度 和 反应温度 相差多少度的。这实际上是需要你用温度计在比色皿中测定的（测定时跟实际反应操作要一致！）。 对于1CM 石英比色皿，装满3 mL 的溶液，在光度计中保温时，从室温升高至37℃ 需要大约5min。但如果水浴的话，也就1min。这个我测过。 你查文献，看看一般的POD测定用多少温度，你就用多少温度好了。但最好测定2℃波动范围对POD活性的影响，这样，即使温度有波动，你心里也有数啊 愈创木酚法测定时是不是颜色变化的很快，一般测得的酶活大概在什么范围内？我做的时候OD值怎么每分钟才变化0.00几? 酶活在什么范围比较准确，这需要你加不同量的POD来做其线性范围。例如在2-50uL POD酶液时，吸光值的变化速率为0.002-0.05/min ，曲线呈较好的线性，这说明，以后你只能在吸光值的变化速率为0.002-0.05/min 范围内测定。 意思就是，你如果反应时间为2min，测定的吸光值变化为0.4， 那么你的酶活测定数据是错的！ |
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