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[求助]
求助用于绝对定量的菌悬液提取DNA的方法
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背景： 1. 菌悬液只包含大肠杆菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌（革兰氏阳性菌）。 2. 根据（不太准的）涂板的结果，菌悬液中细菌个体含量在10^4-10^12之间变化，并且因为实验处理中会加季铵盐杀死细菌，有时不太能直接用OD值估测个体含量。 3. 提取DNA后使用qPCR做绝对定量。 之前的经历： 一开始使用的试剂盒（天根）+溶菌酶，但是注意到说明书上写提取的细胞数量级在10^6-10^8之间，问了下客服说再多了可能会堵塞柱子。并且由于溶菌酶这一步的加入，整个提取DNA的时长增加了不少，所以想替换成其他的方法。溶菌酶想用玻璃珠（glass beads）替换以节省时长，试剂盒法想用煮沸法替换以突破数量级限制。同时如果煮沸法残留很多杂质的话，在冷却后再加入RNA酶和蛋白酶K。 问题： 1. 残留的RNA和蛋白质会影响DNA的qPCR的曲线吗？ 2. 如果按照试剂盒说明加入RNA酶和蛋白酶K分解RNA和蛋白质，在做qPCR之前是否还需要去除剩余的物质（分解后的物质、这两个酶）？不清楚protocol上是否有步骤是做这步的？（说明书链接:https://pan.baidu.com/s/1VziNdgbXgAunwEg3XlMqdQ 提取码:6awy）（这个厂家技术能给说吗） 3. 为什么用玻璃珠法的比用溶菌酶法的protocol这么少，是有什么缺陷吗？ |
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