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ZSder

新虫 (初入文坛)

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[求助] 你好，我蛋白透析的时候，透析袋是截留量8～14kDa的，但是...

你好，我蛋白透析的时候，透析袋是截留量8～14kDa的，但是透析完跑电泳大分子蛋白却没了，小分子蛋白却还在，（期间更换透析液的时候，第一次跟最后一次，透析液都变浑浊了）。请问是我透析夹没夹紧的原因吗？我透析袋是两头都浸没在透析液里的，还是另外的原因？

然后我蛋白提纯做ATKA纯化的时候，目标条带35kDA，还是有30跟25kDa杂带，能不能通过什么方法解决？

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1楼 2021-09-26 10:33:05

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fuyuandj86

版主 (著名写手)

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大蛋白在透析过程中沉淀了吧。

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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.

2楼2021-09-26 11:06:19

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一个不小心就

金虫 (正式写手)

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这显然是沉淀了呀，你把沉淀也跑个胶就知道了。
去除杂蛋白需要试不同方法，不试谁也不知道那种方法好。一些方法供你参考：
1，裂菌后上清用硫酸铵沉淀。如果你目的蛋白表达量很高，那应该比较容易被沉淀下来，合适的硫酸铵用量下能起一个初纯化的作用。
2，阴离子，阳离子，疏水层析都可以试。
3，等电点沉淀也可以用来纯化。
4，以上不能保证成功。有些蛋白就是难搞。
5，透析发生蛋白沉淀，说明你的透析液不太理想。加DTT了吗？

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3楼2021-09-27 15:28:23

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