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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 求助酵母表达的一些问题！
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tj690351018

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助酵母表达的一些问题！

新人培养酵母2个月了，一直表达不出来，求求各位大神救助！！！

本人一直在做某个蛋白的酵母分泌表达，除了电转至GS115菌株外，还电转了一个X33菌株。

前期用含2mg/ml ZEOCIN的YPD平板筛选出几个单克隆，然后用BMGY（PH6.0）把单克隆培养起来，按OD=1的水平接种至BMMY（PH6.0）培养基中，每天添加1%甲醇作为诱导剂诱导酵母表达，持续诱导5天，每天都取样检测蛋白表达。

问题是1.酵母培养液上请中分泌的蛋白极少，直接跑胶基本是空空如也，什么杂蛋白都观察不到。
2.尝试过TCA沉淀、硫酸铵沉淀和丙酮沉淀等方法，虽然可以沉淀出少量物质，但是加水复溶后跑胶也是空空如也（约浓缩30倍），少数泳道会有微弱的蛋白泳道（但不是目的蛋白），这个情况正常吗？
3.按OD=1接种BMMY后，菌液24小时可以长到15左右，后面每24小时大约长2~3，前期生长很快，大量的营养用于菌体生长,所以后期生长又很慢，我想知道是不是我的培养哪里出了问题？
4.酵母的味道很臭，是否正常？偶尔有一点酒味，但更多是一种类似于臭脚丫的味道，这个味道正常吗？

有没有养酵母的大神可以指导一下，谢谢了！
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1楼 2021-09-24 09:17:05
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菜鸡咕噜

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by tj690351018 at 2021-09-24 09:17:05
新人培养酵母2个月了，一直表达不出来，求求各位大神救助！！！

本人一直在做某个蛋白的酵母分泌表达，除了电转至GS115菌株外，还电转了一个X33菌株。

前期用含2mg/ml ZEOCIN的YPD平板筛选出几个单克隆，然后 ...

楼主我们能讨论一下吗我也是同样问题

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5楼2022-06-27 08:27:47
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学员H1PA5u

铁虫 (初入文坛)
好家伙我们情况一样啊呜呜呜，我也是跑胶没有条带，请问你现在解决了吗？我的酵母也贼臭
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2楼2021-10-29 17:01:01
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匿名

本帖仅楼主可见
3楼2021-11-05 08:03:46
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多加辣

新虫 (初入文坛)
同样在做酵母，楼主这些问题解决了吗

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4楼2021-11-10 18:10:25
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