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[求助]
求助酵母表达的一些问题！
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新人培养酵母2个月了，一直表达不出来，求求各位大神救助！！！ 本人一直在做某个蛋白的酵母分泌表达，除了电转至GS115菌株外，还电转了一个X33菌株。 前期用含2mg/ml ZEOCIN的YPD平板筛选出几个单克隆，然后用BMGY（PH6.0）把单克隆培养起来，按OD=1的水平接种至BMMY（PH6.0）培养基中，每天添加1%甲醇作为诱导剂诱导酵母表达，持续诱导5天，每天都取样检测蛋白表达。 问题是1.酵母培养液上请中分泌的蛋白极少，直接跑胶基本是空空如也，什么杂蛋白都观察不到。 2.尝试过TCA沉淀、硫酸铵沉淀和丙酮沉淀等方法，虽然可以沉淀出少量物质，但是加水复溶后跑胶也是空空如也（约浓缩30倍），少数泳道会有微弱的蛋白泳道（但不是目的蛋白），这个情况正常吗？ 3.按OD=1接种BMMY后，菌液24小时可以长到15左右，后面每24小时大约长2~3，前期生长很快，大量的营养用于菌体生长,所以后期生长又很慢，我想知道是不是我的培养哪里出了问题？ 4.酵母的味道很臭，是否正常？偶尔有一点酒味，但更多是一种类似于臭脚丫的味道  ，这个味道正常吗？有没有养酵母的大神可以指导一下，谢谢了！ |
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