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jiang_jjd

木虫 (小有名气)

[交流] 蛋白质多聚体的鉴定

我们的一个蛋白,SDS-PAGE电泳分子量和单体理论分子量一致为36KD,但可能是多聚体,跑PAGE电泳跑不下去,所以想请教有没有好的鉴定多聚体的方法?我们想订Gel filtration Cal Kit HMW来做,但是问遍了许多生物试剂公司都没有,请问在哪能买到。谢谢
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)

★ ★
jiang_jjd(金币+2,VIP+0):thanks 8-21 10:25
GE HEALTHCARE
不过经SDS变性,DTT还原还打不开的聚体可不多见
2楼2009-08-20 16:53:50
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nnxqwei

至尊木虫 (职业作家)

★ ★
jiang_jjd(金币+2,VIP+0):thanks 8-21 10:25
将你的蛋白纯化后跑非变性胶,用上标准分子量Marker, 看你的非变性蛋白的分子量是36KD的多少倍,就是几聚体了。。。
3楼2009-08-20 20:38:16
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jiang_jjd

木虫 (小有名气)

可我们跑PAGE 电泳跑不下去啊!
4楼2009-08-21 10:25:48
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nnxqwei

至尊木虫 (职业作家)

★
jiang_jjd(金币+1,VIP+0):谢谢 8-25 15:14
PAGE 电泳也没有多难的 ,可能是技术问题而已了。。。
5楼2009-08-22 19:49:30
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

★
jiang_jjd(金币+1,VIP+0):谢谢 8-25 15:14
跑不下去

不太可能啊,不行把胶浓度调到最低,300多KD都能分开,你的蛋白不会是10聚体

吧。再不行的话就倒个大板胶高电压来跑,还不信了就。

[ Last edited by brightfuture01 on 2009-8-22 at 21:46 ]
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
6楼2009-08-22 21:44:54
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jiang_jjd

木虫 (小有名气)

我们跑PAGE 电泳的时候拖尾现象很严重,有什么方法可以解决呢?谢谢!
7楼2009-08-25 15:17:26
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pingh_2004

铁虫 (初入文坛)

★ ★
jiang_jjd(金币+2,VIP+0): 8-27 11:22
可以跑一个SEC-HPLC

做非变性胶,需要综合考虑,蛋白的电荷及聚体情况才能做出判断
8楼2009-08-27 10:13:47
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jiang_jjd

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by pingh_2004 at 2009-8-27 10:13:
可以跑一个SEC-HPLC

做非变性胶,需要综合考虑,蛋白的电荷及聚体情况才能做出判断

请问有没有具体的方法,和哪些机构能做?谢谢
9楼2009-08-27 11:25:10
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一天718

金虫 (小有名气)

★ ★
jiang_jjd(金币+2,VIP+0): 8-28 09:22
SEC-HPLC肯定可以
非还原电泳也可以。跑不下去可能是胶的浓度太高了,降下来看看,36KD的蛋白分子量不算大的,另外电压可以高一点。
10楼2009-08-27 12:01:20
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