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Tiancccccc

铁虫 (小有名气)

[求助] 适配体和细菌的结合试验

最近在做带有荧光修饰的适配体和细菌的结合试验,需要测定试验的Kd值。查阅文献找到了两种方法。
一种是直接测定结合后的荧光强度,然后利用荧光强度与适配体浓度作图从而求出Kd值,公式是:F=Bmax*C/(Kd+C),但是我不清楚Bmax取什么值
第二种是流式,通过测定结合数来计算Kd,公式是y=Bmax*C/(Kd+C),Y是与适配体结合的细菌数,C为适配体浓度,Bmax为特定适体的最大结合能力,我之前做的是流式的摄取,然后找不出来结合的细菌数,如果想要通过流式做这个是需要怎么操作呢?然后这个的Bmax我也不知道取什么。
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紫流苏樱雪

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Tiancccccc at 2021-09-09 00:47:25
我现在知道了,bmax直接用拟合做,我还是想问一下流式怎么做这个实验

请问博主这个是怎么拟合的呢,我最近也在做适配体Kd值,我是用SGI荧光实验做的,文献中的拟合曲线是Y=(F-F0)*X/(Kd+X),然后Y的话文献中说是用(F-F0)/F0,总感觉有点怪怪的,大神能不能指点一下呢?

发自小木虫Android客户端
3楼2021-12-22 23:36:35
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Tiancccccc

铁虫 (小有名气)

我现在知道了,bmax直接用拟合做,我还是想问一下流式怎么做这个实验

发自小木虫Android客户端
2楼2021-09-09 00:47:25
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Tiancccccc

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 紫流苏樱雪 at 2021-12-22 23:36:35
请问博主这个是怎么拟合的呢,我最近也在做适配体Kd值,我是用SGI荧光实验做的,文献中的拟合曲线是Y=(F-F0)*X/(Kd+X),然后Y的话文献中说是用(F-F0)/F0,总感觉有点怪怪的,大神能不能指点一下呢?
...

直接测出来荧光值,然后graphpad拟合一个曲线,就得到了一个Kd。
4楼2022-05-18 14:10:21
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