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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 适配体和细菌的结合试验
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Tiancccccc

铁虫 (小有名气)

[求助] 适配体和细菌的结合试验

最近在做带有荧光修饰的适配体和细菌的结合试验，需要测定试验的Kd值。查阅文献找到了两种方法。
一种是直接测定结合后的荧光强度，然后利用荧光强度与适配体浓度作图从而求出Kd值，公式是：F=Bmax*C/(Kd+C)，但是我不清楚Bmax取什么值
第二种是流式，通过测定结合数来计算Kd，公式是y=Bmax*C/(Kd+C)，Y是与适配体结合的细菌数，C为适配体浓度，Bmax为特定适体的最大结合能力，我之前做的是流式的摄取，然后找不出来结合的细菌数，如果想要通过流式做这个是需要怎么操作呢？然后这个的Bmax我也不知道取什么。
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1楼 2021-09-08 12:37:33
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Tiancccccc

铁虫 (小有名气)
我现在知道了，bmax直接用拟合做，我还是想问一下流式怎么做这个实验

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2楼2021-09-09 00:47:25
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紫流苏樱雪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Tiancccccc at 2021-09-09 00:47:25
我现在知道了，bmax直接用拟合做，我还是想问一下流式怎么做这个实验

请问博主这个是怎么拟合的呢，我最近也在做适配体Kd值，我是用SGI荧光实验做的，文献中的拟合曲线是Y=（F-F0）*X/(Kd+X)，然后Y的话文献中说是用（F-F0）/F0，总感觉有点怪怪的，大神能不能指点一下呢？

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3楼2021-12-22 23:36:35
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Tiancccccc

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 紫流苏樱雪 at 2021-12-22 23:36:35
请问博主这个是怎么拟合的呢，我最近也在做适配体Kd值，我是用SGI荧光实验做的，文献中的拟合曲线是Y=（F-F0）*X/(Kd+X)，然后Y的话文献中说是用（F-F0）/F0，总感觉有点怪怪的，大神能不能指点一下呢？
...

直接测出来荧光值，然后graphpad拟合一个曲线，就得到了一个Kd。
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4楼2022-05-18 14:10:21
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