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lanlan1119金虫 (小有名气)
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[交流]
【求助】请熟悉考马斯亮兰法测蛋白含量的高手指点实验中遇到的问题。
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我用考马斯亮兰法测蛋白含量时，做标准曲线用的G-球蛋白溶液（1mg/ml）是用纯化水溶解的，得到的标准曲线相关性是0.99947。 但做样品时，样品在纯化水中很难溶解，我用0.5%的碳酸氢钠溶解配制成1mg/ml（空白加入0.1ml的0.5%的碳酸氢钠和5ml的考马斯亮兰，且0.5%的碳酸氢钠在595nm下测紫外吸收为0.001），取0.04ml的样品溶液再用纯化水补充至0.1ml后测定，一共测定了六批样品，得到的蛋白含量都在0.5%左右，而用hplc测得的六批样品纯度都在95%以上，蛋白含量测定值明显偏高。 问题是不是出在标准曲线上啊，因为标准曲线是用纯化水溶解的，而样品测定时是用0.5%的碳酸氢钠溶解的。 请有经验的高手指点 [ Last edited by lanlan1119 on 2009-8-20 at 10:48 ] |
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chinabull
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